Pierce™ Firefly Luciferase Glow Assay Kit
Pierce™ Firefly Luciferase Glow Assay Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Firefly Luciferase Glow Assay Kit

Das Thermo Scientific Pierce Firefly Luciferase Glow-Assay-Kit bietet ein helles und stabiles Biolumineszenzsignal (Halbwertszeit von mehr als 2 Stunden) inWeitere Informationen
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KatalognummerMenge
16177Kit für 1000 Reaktionen
16176100 Reaktionskit
Katalognummer 16177
Preis (EUR)
816,00
Each
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Menge:
Kit für 1000 Reaktionen
Preis (EUR)
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Das Thermo Scientific Pierce Firefly Luciferase Glow-Assay-Kit bietet ein helles und stabiles Biolumineszenzsignal (Halbwertszeit von mehr als 2 Stunden) in Anwesenheit von Glühwürmchen-Luziferase-Reportern für Proteinexpressionsassays.

Merkmale des Firefly Luciferase Glow-Assay-Kits:

Empfindlich— Hochempfindlicher Nachweis der Glühwürmchen-Luziferase-Aktivität; für beste Ergebnisse (maximales Signal) Verwendung mit dem Pierce Glühwürmchen-Luziferase-Signalverstärker
Stabil— Erhöhte Signalstabilität im Vergleich zu Flash-Assays
Einfach— Erfordert kein Luminometer mit Injektoren
Kompatibel— Die Assayreagenzien sind mit anderen Glühwürmchen-Luziferasen kompatibel
Geeignet für Automatisierungsprozesse— Für Assays mit hohem Durchsatz geeignet
Praktisch— Enthält einen universellen Zelllysepuffer und ein optimiertes Glow-Assay-Reagenz
Sicher— Ermöglicht die Durchführung nicht radioaktiver Assays

Dieses Pierce Luciferase Glow-Assay-Kit enthält Reagenzien zur Messung der Glühwürmchen-Luziferase-Aktivität in Zelllysaten. In Gegenwart von Glühwürmchen-Luziferase liefert das Glimmreagenz ein stabiles biolumineszentes Signal und eignet sich in hohem Maße für Luminometer ohne Injektoren oder für die Chargenverarbeitung von Proben. Die Lichtleistung, die durch die Luziferase-Reaktion erzeugt wird, kann mit der Menge des produzierten Luziferase-Proteins korreliert werden, das wiederum proportional zur Aktivität des Promoters ist, der die Luziferase-Expression antreibt. Diese Glow-Assay-Reagenzien sind für optimale Ergebnisse mit Thermo Scientific Firefly Luc-Plasmiden optimiert. Dieses Assay-Kit kann jedoch auch verwendet werden, um die Aktivität anderer Glühwürmchen- oder ATP-abhängiger Luziferasen nachzuweisen, die D-Luciferin als Substrat verwenden.

Lieferumfang:
Zelllysepuffer, Reaktionspuffer und Substrat; Luziferase-Signalverstärker ist separat zu erwerben.

Erforderlich:
• Glühwürmchen-Luziferase und Luminometer oder ein anderes Gerät zur Überwachung der Lumineszenz, z. B. Thermo Scientific Luminoskan Ascent und Varioskan Flash Mikrotiterplatten-Lesegeräte.
• Für optimale Ergebnisse (maximales Signal) verwenden Sie den Pierce Glühwürmchenluziferase-Signalverstärker

Anwendungen:
• Promoter-Studien zur Analyse von cis-regulatorischen Elementen und trans-wirkenden Faktoren
• Arzneimittelscreening
• siRNA- und miRNA-Screening
• Multiplex-Assays zur Untersuchung von Off-Target-Effekten
• Proteinlokalisierungsreporter-Assays
• Signaltransduktionspfadanalyse
• RNA-Spleißstudien

Glühwürmchen-Luziferase ist ein 60 kDa-Protein, das in der Natur von mehreren Arten der Lampyridae-Käferfamilie produziert wird, zu denen die Gattungen Photinus und Luciola gehören. Das biolumineszente Signal von Glühwürmchen-Luziferase stammt aus der Oxidation von D-Luciferin. Die Lichtleistung, die durch die Luziferase-Reaktion erzeugt wird, wird mit einem Luminometer erfasst und kann mit der Menge an Glühwürmchen-Luziferase-Protein korreliert werden, das produziert wird und zur Bestimmung der Aktivität des Promoters verwendet wird, der die Glühwürmchenexpression antreibt. Die native Glühwürmchen-Luziferase erzeugt ein starkes Flash-Signal, das schnell zerfällt. Das mit dem Pierce Firefly Glob Assay Kit erzeugte Signal ist stabiler und zerfällt sehr langsam, wodurch ein Luminometer mit Injektoren überflüssig wird.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Specifications
AssayReporter-Enzym, Luziferase-Reporter-Assay
Kompatible ZellenSäugetierzellen
NachweisverfahrenBiolumineszierend
Zur Verwendung mit (Geräte)Luminometer (Mikrotiterplatte)
Format384-Well-Platte, 96-Well-Platte
MarkertypEnzym-markiert
ProduktliniePierce
MengeKit für 1000 Reaktionen
SubstratD-Luciferin
SubstrateigenschaftenChemisches Substrat
SubstrattypLuziferase-Substrat
ZielLuziferase, Glühwürmchen-Luziferase
VerfahrenVerbesserte Chemolumineszenz
TypAssay-Kit
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
• Glühwürmchen-Glow-Assay-Puffer, 50 ml, Aufbewahrung bei -20 °C
• D-Luciferin, lyophilisiert, 30 mg, Aufbewahrung bei 4 °C
• 2X Zelllysepuffer, 60 ml, Aufbewahrung bei Raumtemperatur

Nach Erhalt das Kit bei -20 °C lagern oder die einzelnen Komponenten wie oben angegeben lagern.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

I got a high background signal with a Firefly Luciferase Glow/Flash assay. Why is this?

This could be due to contamination of the control sample. Make sure to use new sample and change pipette tips after each well.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

I got a high signal with a Firefly Luciferase Glow/Flash assay. What could have happened?

This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample 
    Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay



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    What could be causing no signal or low signal with the Firefly Luciferase Glow/Luciferase Flash assay? Do you have any suggestions to get around this problem?

    Here are possible causes and solutions:

    - Low transfection efficiency: Optimize transfection conditions using a visual transfection control (e.g., a plasmid over-expressing a fluorescent protein); Verify plasmid DNA quality - use only transfection grade DNA; Use actively dividing, low passage cells; Use a different cell type.
    - No or low promoter activity: Use conditions known for promoter activation; Incubate cells for a longer time; Change growth conditions to improve expression; Use a different promoter.
    - D-luciferin auto-oxidized: Protect substrate from light and maintain 100X D-luciferin at -20 degrees C; Prepare new Working Solution if used longer than 4 hours.
    - Low luciferase expression: Use Pierce Firefly Signal Enhancer (100X) (Cat. No. 16180); Lyse cells in a smaller volume of 1X Cell Lysis Buffer; Use a different promoter or growth conditions to improve expression; Increase the integration time on the instrument; Scale-up the volume of sample and reagent per well.
    - Degraded luciferase protein: Store cell lysates on ice and perform assays immediately following cell lysis.

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    I got a high background signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What went wrong?

    Here are possible causes and solutions:

    - Non-specific oxidation of substrate: Use less serum in the cell culture media; Note: Albumin can increase the auto-oxidation of Vargulin; Avoid repeated freezing and thawing of the sample.
    - Control sample is contaminated: Use new sample; Change pipette tips after each well.

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    I am getting a high saturating signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What could have happened?

    This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample: for secreted Gaussia/Cypridina Luciferase, dilute the sample using media from the cell culture; for cell lysate, dilute the sample using lysis buffer 


  • Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay.

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