Das Thermo Scientific Pierce Cypridina-Firefly Luciferase Dual Assay-Kit enthält die notwendigen Reagenzien, um gleichzeitig intrazelluläre Cypridina- und Red Firefly-Luziferase-Aktivität in Säugetier-Ganzzelllysaten zu erkennen.

Merkmale des Cypridina-Firefly Luciferase Dual Assay-Kits:

• Gleichzeitig— Gleichzeitiger, filterbasierter, wellenlängengetrennter Nachweis von zwei Luziferase-Aktivitäten
• Empfindlich— Messen hellblauer Cypridina- und Red Firefly-Luziferase-Aktivitäten in derselben Probe
• Schnell— Im Gegensatz zu herkömmlichen sequenziellen Dual-Assays ist kein Quenching-Schritt erforderlich
• Multiplex— Quantifizierung von zwei zellulären Aktivitäten in der- bzw. denselben Proben möglich

Das Pierce Cypridina-Firefly Luciferase Dual Assay-Kit ist ein hochempfindlicher Assay, der den gleichzeitigen Nachweis von Cypridina- und Red Firefly Luziferase-Aktivität ermöglicht. Cypridina-Luziferase fungiert als Experimentalreporter mit konstitutiv aktivem roten Glühwürmchen als Normalisierungskontrolle. Wie die nachfolgenden Animationsvideos zeigen, ermöglicht diese Kombination aus Reporter und Kontrolle die gleichzeitige Überwachung experimenteller Reporter- und Kontrollaktivitäten von Luziferase in einem Single-Read-Assay, ohne dass eine Zugabe von Substratreagenzien oder ein Quenching in zwei Schritten erforderlich ist. Die Assay-Arbeitslösung enthält Substrate für beide Luziferasen, und die Reaktionen erfolgen gleichzeitig mit der Flash-Kinetik. Die daraus resultierenden lumineszenten Signale sind mit Filtern spektral auflösbar. In einer einzigen Probe können Forscher die transkriptionale Aktivität von regulatorischen Elementen, Signaltransduktionswege und die Auswirkungen von Aktivatoren oder Inhibitoren testen.

Lieferumfang:
Zelllysepuffer, Reaktionspuffer und die Substrate Vargulin und D-Luciferin

Erforderlich:
Cypridina- und Red Firefly-Luziferase-Reporter; Filtersätze in den Bereichen von 425 bis 525 nm für Cypridina Luc und 615 bis 675 nm für Red Firefly Luc. Luminometer oder ein anderes Gerät zur Überwachung der Lumineszenz, z. B. Thermo Scientific Luminoskan Ascent und Varioskan Flash Mikrotiterplatten-Lesegeräte; Injektor für die Bewertung von mehr als 24 Wells auf einmal erforderlich.

Anwendungen:
• Gleichzeitige Untersuchung von zwei regulatorischen Elementen
• Gleichzeitige Überwachung von zwei Signalwegen
• Möglichkeit der Untersuchung von mehr als einem Ziel pro Screening (z. B. Off-Target-Effekte)

Anwendungsvideos:
Cypridina-Luciferase erzeugt ein helleres Biolumineszenzsignal als Glühwürmchen- und native Renilla-Luziferase. Das Biolumineszenzsignal, das von Cypridina-Luziferase erzeugt wird (λmax = 463 nm) resultiert aus der Oxidation von Vargulin. Für diese Reaktion sind weder Adenosintriphosphat (ATP) noch andere Kofaktoren erforderlich. Die Red Firefly-Luziferase ist eine mutierte Form der japanischen Glühwürmchen-Luziferase aus Luciola cruciata. Diese Luziferase erzeugt ein rotverschobenes Emissionsspektrum (λmax = 613 nm), das durch die Oxidation von D-Luciferin in Gegenwart von ATP entsteht. Red Firefly- und Cypridina-Luziferasen werden im Dual-Assay verwendet, da die Sinale spektral auflösbar sind.

Weitere Produktdaten
• Hochempfindliche Multiplex-Luziferase-Reporter-Assays
• Gleichzeitiger Nachweis von Doppelemission von Luziferase-Reporter-Assays
• Überwachung der neuronalen Differenzierung mit Multiplex-Luciferase-Reportern
• Aktivierung des Antioxidansreaktionswegs durch Pestizidchemikalien