Pierce™ Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit

Das Thermo Scientific Pierce Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay-Kit enthält die erforderlichen Reagenzien für den gleichzeitigen Nachweis der intrazellulären Renilla- und Red Firefly-Luziferase-Aktivität in Säugetier-Ganzzelllysaten.

Merkmale des Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay-Kits:

• Gleichzeitig— Gleichzeitiger, filterbasierter, wellenlängengetrennter Nachweis von zwei Luziferase-Aktivitäten
• Empfindlich— Messen der Green Renilla- und Red Firefly-Luziferase-Aktivität in derselben Probe
• Schnell— Im Gegensatz zu herkömmlichen sequenziellen Dual-Assays ist kein Quenching-Schritt erforderlich
• Multiplex— Quantifizierung von zwei zellulären Aktivitäten in der- bzw. denselben Proben möglich

Das Pierce Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay-Kit ist ein hochempfindlicher Assay, der den gleichzeitigen Nachweis von Green Renilla- und Red Firefly-Luziferase-Aktivität ermöglicht. Green Renilla-Luziferase fungiert als experimenteller Reporter mit konstitutiv aktivem Red Firefly-Signal als Normalisierungskontrolle. Wie das nachfolgende Animationsvideo zeigt, ermöglicht diese Kombination aus Reporter und Kontrolle die gleichzeitige Überwachung experimenteller Reporter- und Kontrollaktivitäten von Luziferase in einem Single-Read-Assay, ohne dass eine Zugabe von Substratreagenzien oder ein Quenching in zwei Schritten erforderlich ist. Die Assay-Arbeitslösung enthält Substrate für beide Luziferasen, und die Reaktionen erfolgen gleichzeitig mit der Flash-Kinetik. Die daraus resultierenden lumineszenten Signale sind mit Filtern spektral auflösbar. In einer einzigen Probe können Forscher die transkriptionale Aktivität von regulatorischen Elementen, Signaltransduktionswege und die Auswirkungen von Aktivatoren oder Inhibitoren testen.

Lieferumfang:
Zelllysepuffer, Reaktionspuffer und die Substrate Coelenterazin und D-Luciferin

Erforderlich:
GreenRenilla- und Red Firefly-Luziferase-Reporter; Filtersätze in den Bereichen von 525 nm ± 20 nm für Green Renilla Luc und 615 bis 675 nm für Red Firefly Luc. Luminometer oder ein anderes Gerät zur Überwachung der Lumineszenz, z. B. Thermo Scientific Luminoskan Ascent und Varioskan Flash Mikrotiterplatten-Lesegeräte; Injektor für die Bewertung von mehr als 24 Wells auf einmal erforderlich.

Anwendungen:
• Gleichzeitige Untersuchung von zwei regulatorischen Elementen
• Gleichzeitige Überwachung von zwei Signalwegen
• Möglichkeit der Untersuchung von mehr als einem Ziel pro Screening (z. B. Off-Target-Effekte)

Green Renilla erzeugt ein helleres Biolumineszenzsignal als Glühwürmchen- und native Renilla-Luziferasen. Das Biolumineszenzsignal (λmax = 535 nm), das vom Green Renilla-Luziferase-Protein produziert wird, resultiert aus der Oxidation von Coelenterazin. Der zweite Assay verwendet die Red Firefly-Luziferase, eine mutierte Form der japanischen Firefly-Luziferase Luciola cruciata. Diese Luziferase erzeugt ein rotverschobenes Emissionsspektrum (λmax = 613 nm), das durch die Oxidation von D-Luciferin in Gegenwart von ATP entsteht.

Mehr Produktdaten
• Gleichzeitiger Doppelemissionsnachweis in Luziferase-Reporter-Assays

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