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CIAP (Calf Intestinal Alkaline Phosphatase), 1 U/μL
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CIAP (Calf Intestinal Alkaline Phosphatase), 1 U/μL

Calf-Intestinal-Alkalinphosphatase (CIAP) ist eine Phosphomonoesterase, die 3´- und 5´-Phosphate aus DNA und RNA entfernt.Konzentration: 1 Einheit/µlAnwendungen: Dephosphorylierung von 5´-phosphorylierten TerminiWeitere Informationen
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KatalognummerMenge
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Katalognummer 18009027
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Calf-Intestinal-Alkalinphosphatase (CIAP) ist eine Phosphomonoesterase, die 3´- und 5´-Phosphate aus DNA und RNA entfernt.

Konzentration: 1 Einheit/µl

Anwendungen: Dephosphorylierung von 5´-phosphorylierten Termini der Vektor-DNA zum Verhindern von Selbstligation (1). Dephosphorylierung von 5´-Termini von Nukleinsäuren vor der Vorwärtsreaktion mit Kinase.

Quelle: Aus Kalbintestinalschleimhaut aufgereinigt.

Leistungs- und Qualitätskontrolle: Endodeoxyribonuklease-, 3´-Exodeoxyribonuklease- und Ribonuklease-Assays; Effizienz der Dephosphorylierung, gemessen in einem Transformationsassay

Einheiten-Definition: Eine Einheit hydrolysiert 1 µmol 4-Nitrophenylphosphat in 1 Minute bei 37°C

Reaktionsbedingungen pro Einheit: 1 M Diethanolaminpuffer, 10 mM 4-Nitrophenylphosphat, 0,25 mM MgCl2 (pH-Wert 9,8) in 900 µl 10 min lang bei 37°C.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Specifications
Kompatibler PufferDiethanolamin-Puffer
ProdukttypAlkalische Phosphatase
Menge1000 E
VersandbedingungZugelassen für den Versand auf Nass- oder Trockeneis
Konzentration1 U/μl
EnzymCIP
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
Calf-Intestinal-Akalinphosphatase (1 Einheit/µl) wird mit einem Fläschchen mit 10x Dephosphorylierungspuffer [500 mM Tris-HCl (pH-Wert 8,5), 1 mM EDTA], Fläschchen mit Verdünnungspuffer [50 % Glycerin, 25 mM Tris-HCl (pH-Wert 7,6), 1 mM MgCl2 und 0,1 mM ZnCl2] geliefert. Calf-Intestinal-Alkalinphosphatase bei -20°C lagern.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

What other enzymes besides ligase may I need to perform restriction cloning?

Dephosphorylating the vector to decrease background can be achieved with:
Heat Inactivated Alkaline Phosphatase, or Calf Intestinal Alkalline Phosphatase (available as 1 unit/µL or 20 units/µL)

If you need to create blunt phosphorylated DNA ends (“polishing” the ends), you can use:
DNA End Repair Mix or T4 DNA polymerase or Klenow Fragment (large fragment) of E. coli DNA polymerase to generate blunt ends due to their 5' to 3' DNA polymerase activity (filling-in of 5' overhangs) and 3' to 5' exonuclease activity (chewing back of 3' overhangs).

What enzymes can be used to remove 5' phosphate groups, and what enzyme can be used to add the phosphate groups back on?

CIP/CIAP or BAP can dephosphorylate the 5' ends of DNA/RNA. T4 Polynucleotide Kinase can add back phosphate groups.

Why are alkaline phosphatases used in cloning protocols? What is a typical protocol for dephosphorylation of nucleic acids?

Alkaline phosphatases are used to dephosphorylate the 5' ends of DNA. In cloning, it is used to prevent self-ligation of vector DNA. Standard ligation of DNA with ligase requires a 5' phosphate to be present on at least one of the ends being joined. When a DNA insert containing phosphates on both 5' termini is added to a dephosphorylated vector, the insert will be efficiently ligated into the vector, but the vector will not be able to self-ligate. Thus, dephosphorylation of vector lowers the number of background colonies containing vector without insert.