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Zitierungen und Referenzen (7)
Invitrogen™
SuperScript™ III System für Erststrangsynthese
Optimiert für die Synthese von Erststrang-cDNA aus gereinigter Poly(A)+ oder Gesamt-RNA oder RT-PCR
| Katalognummer | Menge |
|---|---|
| 18080051 | 50 rxns |
Katalognummer 18080051
Preis (EUR)
948,00
Each
Menge:
50 rxns
Preis (EUR)
948,00
Each
Das SuperScript™ III Erststrang-Synthesesystem für RT-PCR ist für die Synthese von Erststrang-cDNA aus gereinigter Poly(A)+- oder Gesamt-RNA optimiert. Mit diesem System können RNA-Ziele von 100 bp bis > 12 kb nachgewiesen werden. Die Menge des Ausgangsmaterials kann im Bereich von 1 pg–5 µg der Gesamt-RNA liegen. SuperScript™ III Reverse Transkriptase ist eine Version von M-MLV RT, die zur Reduzierung der RNase-H-Aktivität entwickelt wurde und eine höhere thermische Stabilität bietet. Das Enzym wird zur Synthetisierung von cDNA in einem Temperaturbereich von 42–55 °C verwendet und bietet eine erhöhte Spezifität, eine höhere cDNA-Ausbeute und mehr Produkte voller Länge als andere reverse Transkriptasen. Da Superscript™ III RT nicht signifikant durch ribosomale und Transfer-RNA gehemmt wird, kann es zur Synthese von Erststrang-cDNA aus einer Gesamt-RNA-Vorbereitung verwendet werden.
Verwendung des Superscript™ III Erststrangsystems
Die cDNA-Synthese erfolgt im ersten Schritt entweder mit der Gesamt-RNA oder mit Poly(A)+-selektierter RNA, die an Oligo(dT), zufällige Primern oder einen genspezifischen Primer gebunden haben. Im zweiten Schritt wird die PCR in einem separaten Röhrchen mit den für das gewünschte Gen spezifischen Primern durchgeführt. Für die PCR-Reaktion empfehlen wir den Einsatz einer der folgenden DNA-Polymerasen: Platinum™ Taq DNA-Polymerase schafft automatische Hot-Start-Bedingungen mit höherer Spezifität bis zu 4 kb, Platinum™ Taq DNA-Polymerase bietet eine höhere Ausbeute und höchste Genauigkeit für Zielsequenzen bis zu 15 kb, und Platinum™ PfxDNA-Polymerase sorgt für höchste Genauigkeit für Zielsequenzen bis 12 kb.
Verwendung des Superscript™ III Erststrangsystems
Die cDNA-Synthese erfolgt im ersten Schritt entweder mit der Gesamt-RNA oder mit Poly(A)+-selektierter RNA, die an Oligo(dT), zufällige Primern oder einen genspezifischen Primer gebunden haben. Im zweiten Schritt wird die PCR in einem separaten Röhrchen mit den für das gewünschte Gen spezifischen Primern durchgeführt. Für die PCR-Reaktion empfehlen wir den Einsatz einer der folgenden DNA-Polymerasen: Platinum™ Taq DNA-Polymerase schafft automatische Hot-Start-Bedingungen mit höherer Spezifität bis zu 4 kb, Platinum™ Taq DNA-Polymerase bietet eine höhere Ausbeute und höchste Genauigkeit für Zielsequenzen bis zu 15 kb, und Platinum™ PfxDNA-Polymerase sorgt für höchste Genauigkeit für Zielsequenzen bis 12 kb.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Specifications
EndprodukttypErststrang-cDNA
FormatKit
Anzahl Reaktionen50 Reaktionen
Optimale Reaktionstemperatur50 °C
Menge50 rxns
ReaktionsformatSeparate Komponenten
ReagenztypReverse Transkription
Reverse TranskriptaseSuperScript III
VersandbedingungTrockeneis
AusgangsmaterialRNA
VerfahrenReverse Transkription
Zur Verwendung mit (Anwendung)Real-Time PCR (qPCR), RT-PCR
GC-Rich PCR PerformanceHoch
Reaktionsgeschwindigkeit50 min
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
Das SuperScript™ III Erststrang-Synthesesystem für RT-PCR wird geliefert mit:
• Oligo(dT)20 (50 μM), 50 μl
• Zufällige Hexamere (50 ng/μl), 250 μl
• 10x RT-Puffer, 1 ml
• 0,1 M DTT, 250 μl
• 25 mM Magnesiumchlorid, 500 μl
• 10 mM dNTP-Mix, 250 μl
• SuperScript III RT (200 E/μl), 50 μl
• RNaseOUT (40 E/μl), 100 μl
• E. coli RNase H (2 E/μl), 50 μl
• DEPC-behandeltes Wasser, 1,2 ml
• HeLa-Gesamt-RNA (10 ng/μl), 20 μl
• Sense Kontroll-Primer (10 μM), 25 μl
• Antisense Kontroll-Primer (10 μM), 25 μl
Ausreichend für 50 Reaktionen, auf Basis eines Reaktionsvolumens von 20 μl. Bei -20°C lagern.
• Oligo(dT)20 (50 μM), 50 μl
• Zufällige Hexamere (50 ng/μl), 250 μl
• 10x RT-Puffer, 1 ml
• 0,1 M DTT, 250 μl
• 25 mM Magnesiumchlorid, 500 μl
• 10 mM dNTP-Mix, 250 μl
• SuperScript III RT (200 E/μl), 50 μl
• RNaseOUT (40 E/μl), 100 μl
• E. coli RNase H (2 E/μl), 50 μl
• DEPC-behandeltes Wasser, 1,2 ml
• HeLa-Gesamt-RNA (10 ng/μl), 20 μl
• Sense Kontroll-Primer (10 μM), 25 μl
• Antisense Kontroll-Primer (10 μM), 25 μl
Ausreichend für 50 Reaktionen, auf Basis eines Reaktionsvolumens von 20 μl. Bei -20°C lagern.
Häufig gestellte Fragen (FAQ)
I am interested in generating cDNA from total RNA. What is the difference between SuperScript III Reverse Transcriptase and SuperScript III First Strand Synthesis System for RT-PCR?
How long can I store the cDNA from my reverse transcription step?
How can I remove genomic DNA contamination from my sample prior to performing RT-PCR?
How much RNA should be employed for first-strand cDNA synthesis?
Should I treat the cDNA with RNase H prior to downstream processing?
Zitierungen und Referenzen (7)
Zitierungen und Referenzen
Abstract
The UL41 protein of herpes simplex virus 1 degrades RNA by endonucleolytic cleavage in absence of other cellular or viral proteins.
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:16477041
The herpes simplex virus 1 ORF UL41 encodes a protein (virion host shutoff or vhs) associated with selective degradation of mRNA early in infection. Some mRNAs, exemplified by GAPDH or beta-actin mRNAs, are degraded rapidly. Others, for example IEX-1 mRNA, are degraded in two stages: whereas the 3' domain disappears
Transcriptional profiling of rhesus monkey embryonic stem cells.
Journal:Biol Reprod
PubMed ID:16943365
Embryonic stem cells (ESCs) may be able to cure or alleviate the symptoms of various degenerative diseases. However, unresolved issues regarding survival, functionality, and tumor formation mean a prudent approach should be adopted towards advancing ESCs into human clinical trials. The rhesus monkey provides an ideal model organism for developing
Novel GC-rich DNA-binding compound produced by a genetically engineered mutant of the mithramycin producer Streptomyces argillaceus exhibits improved transcriptional repressor activity: implications for cancer therapy.
Journal:Nucleic Acids Res
PubMed ID:16571899
The aureolic acid antibiotic mithramycin (MTM) binds selectively to GC-rich DNA sequences and blocks preferentially binding of proteins, like Sp1 transcription factors, to GC-rich elements in gene promoters. Genetic approaches can be applied to alter the MTM biosynthetic pathway in the producing microorganism and obtain new products with improved pharmacological
Temperature-modulated diversity of TRPV4 channel gating: activation by physical stresses and phorbol ester derivatives through protein kinase C-dependent and -independent pathways.
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:12738791
The TRPV4 calcium-permeable channel was cloned from mouse kidney M-1 cells, and the effect of temperature modulation on channel gating/activation by physical and chemical signals was evaluated. A TRPV4 cDNA construct with a C-terminal V5 epitope was stably transfected into human embryonic kidney (HEK) 293 and Chinese hamster ovary cells
Endogenous 24(S),25-epoxycholesterol fine-tunes acute control of cellular cholesterol homeostasis.
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:17981807
Certain oxysterols, when added to cultured cells, are potent regulators of cholesterol homeostasis, decreasing cholesterol synthesis and uptake and increasing cholesterol efflux. However, very little is known about whether or not endogenous oxysterol(s) plays a significant role in cholesterol homeostasis. 24(S),25-Epoxycholesterol (24,25EC) is unique among oxysterols in that it is