Dieses Thermo Scientific NAb Protein A/G-Spin-Kit eignet sich für die schnelle Affinitätsreinigung von Antikörpern im kleinen Maßstab aus einer Vielzahl von Probentypen. In jedem Kit sind ausreichend NAb Protein A/G-Spin-Säulen, Entnahmeröhrchen, Puffer und ein optimiertes Protokoll zur Reinigung von mindestens 2 Antikörperproben enthalten.

Merkmale von Pierce Protein A/G-Agarose:

• Protein A/G – immobilisiertes rekombinantes Fusionsprotein der Antikörper-bindenden Domänen von Protein A und Protein G ermöglicht eine polyklonale IgG-Aufreinigung für nahezu alle Säugetierarten
• Agaroseharz – als Träger dient ein vernetztes 6%iges Agarosegranulat (CL-6B), das beliebteste Harz für Verfahren zur Affinitätsreinigung von Proteinen
• Inert und stabil – erstklassiges Fertigungsverfahren immobilisiert Protein A/G durch ladungsfreie, Laugen-resistente kovalente Bindungen, die zu einer geringen unspezifischen Bindung führen und ohne Ausbeuteverlust vielfältig einsetzbar sind
• Standardkapazität – Pierce Protein A/G-Agarose enthält eine normale Menge an immobilisiertem Protein A/G und ermöglicht eine Bindungskapazität von über 7 mg humanem IgG/ml Harz

Pierce Protein A/G-Agarose besteht aus aufgereinigtem Protein A/G-rekombinanten Fusionsprotein, das auf hochwertigem, vernetzten, 6%igem Agarosegranulat (CL-6B) kovalent immobilisiert wurde. Diese spezielle Harz-Variante zeichnet sich durch die vielseitigste Kombination chromatographischer Eigenschaften aus und sorgt bei der Aufreinigung von intaktem IgG aus Serumproben von Säugetieren für eine hohe Ausbeute und Reinheit. Dank ihrer physikalischen und chemischen Eigenschaften eignen sich die Agarosekörner für viele Systeme zur Affinitätsreinigung.

Protein A/G ist ein gentechnisch hergestelltes Protein, das die IgG-bindenden Domänen von Protein A und Protein G miteinander kombiniert. Das Fusionsprotein wird in E. coli exprimiert. Protein A/G enthält vier Fc-bindende Domänen von Protein A und zwei Domänen von Protein G und weist eine Masse von 50.460 Dalton (40 bis 45 kDa durch SDS-PAGE) auf. Protein A/G ist nicht so pH-abhängig wie Protein A allein, hat aber ansonsten die additiven Eigenschaften von Protein A und G.

Protein A/G bindet an alle humanen IgG-Unterklassen und ist somit die ideale Wahl für die Aufreinigung von polyklonalen oder monoklonalen IgG-Antikörpern, deren Unterklassenidentitäten nicht bestimmt wurden. Darüber hinaus bindet es IgA, IgE, IgM und (in geringerem Umfang) IgD. Protein A/G bindet auch gut IgG-Subklassen der Maus, jedoch nicht IgA, IgM oder Serum-Albumin der Maus. Das macht Protein A/G zum idealen Hilfsmittel für die Aufreinigung und den Nachweis monoklonaler Antikörper der Maus aus IgG-Subklassen ohne Interferenzen von IgA, IgM und Serum-Albumin der Maus. Einzelne Unterklassen von monoklonalen Mauszellen haben wahrscheinlich eine stärkere Affinität zum chimären Protein A/G als zu Protein A oder Protein G.

Pierce Protein A/G-Agarose wird mithilfe der Thermo Scientific AminoLink Kopplungs-Chemie hergestellt. Diese ist im Vergleich zu einer herkömmlichen Ligandenimmobilisierung mit mehreren Vorteilen verbunden. Bei der AminoLink-Immobilisierung entsteht über einfache Amidbindungen eine Konjugation zwischen Zuckermonomeren des Agarosegranulats und den nativen Lysin-Resten auf dem Protein A. Im Gegensatz zur herkömmlichen Immobilisierung mit Cyanbromid (CNBr) werden durch die AminoLink-Methode keine neuartigen chemischen Gruppen eingebracht, die zu unerwünschten unspezifischen Bindungen führen könnten, und es wird eine stabile und weitgehend irreversible Bindung erzeugt. Das Ergebnis ist ein Harz mit hohem Bindungsvermögen, das auch nach mehreren Runden von Antikörperreinigungen funktionelles immobilisiertes Protein A enthält.

Pierce Protein A/G-Agarose bindet IgG-Isotypen nahezu aller Säugetierarten aus Serum, Aszitesflüssigkeit, Zellkulturüberständen und anderen Antikörperproben und ermöglicht so eine effektive Antikörper-Aufreinigung. Da immobilisiertes Protein A/G die Immunglobulin bindenden Domänen von Protein A und Protein G kombiniert, eignet sich dieses Harz für die Affinitätsreinigung von IgG-Antikörpern aus einer breiten Palette an Seren vieler Säugetierarten.

Merkmale des vernetzten 6%igen Agarosegranulats (CL-6B):
• Unterstützung der pH-Stabilität: 2 bis 14 (kurzfristig); 3 bis 13 (langfristig)
• Durchschnittliche Partikelgröße: 45 bis 165 Mikrometer
• Ausschlussgrenze: 10.000 bis 4.000.000 Dalton
• Maximale volumetrische Durchflussrate: Ca. 1 ml/Minute (für Säulendurchmesser 1 cm)
• Maximale lineare Geschwindigkeit: 30 cm pro Stunde
•Maximaler Druck: weniger als 25 psi (1,5 bar), definiert als der maximale Druckabfall in einer Säule, dem das Harz standhalten kann (Hinweis: Der angezeigte Manometerdruck des Flüssigkeitschromatographiegeräts gibt möglicherweise den Gesamtsystemdruck und nicht den Druckabfall an der Säule wieder.)

Weitere Produktdaten
• Verwendung von Antikörperbindungsproteinen für die Antikörperaufreinigung

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