Pierce™ Protein A/G Plus Agarose

Thermo Scientific Pierce Protein A/G Plus-Agarose ist ein gekörntes Protein A/G-Agaroseharz mit hoher Bindungskapazität, das in vielen Verfahren bei der Antikörper-Affinitätsaufreinigung zum Einsatz kommt.

Merkmale der Protein A/G Plus-Agarose:

• Protein A/G – immobilisiertes rekombinantes Fusionsprotein der Antikörper-bindenden Domänen von Protein A und G ermöglicht eine polyklonale IgG-Aufreinigung bei nahezu allen Säugetierarten
• Agaroseharz – der Träger ist eine vernetzte 6%ige gekörnte Agarose (CL-6B), das beliebteste Harz zur Affinitätsaufreinigung von Proteinen
• Inert und stabil – das erstklassige Fertigungsverfahren immobilisiert Protein A/G durch ladungsfreie, Laugen-resistente kovalente Bindungen, die zu einer geringen unspezifischen Bindung führen und ohne Ausbeuteverlust vielfältig einsetzbar sind
• Hohe Kapazität – diese “Plus”-Variante der Pierce Protein A/G-Agarose enthält eine sehr hohe Menge an immobilisiertem Protein A/G und bietet ein Bindungsvermögen von über 50 mg humanem IgG/ml-Harz

Pierce Protein A/G Plus-Agarose besteht aus aufgereinigtem Protein A/G-rekombinantem Fusionsprotein, das mit hoher Dichte auf 6 % hochwertiger, vernetzter und gekörnter Agarose (CL-6B) kovalent immobilisiert wurde. Da das Protein A/G die Immunglobulin-bindenden Domänen von Protein A und G kombiniert, bietet das Granulat eine wirksame Affinitätsaufreinigung von IgG-Antikörpern aus verschiedenen Säugetierwirten.

Protein A/G ist ein gentechnisch hergestelltes Protein, das die IgG-bindenden Domänen von Protein A und G miteinander kombiniert. Das Fusionsprotein wird in E. coli exprimiert. Protein A/G enthält vier Fc-bindende Domänen von Protein A und zwei Domänen von Protein G und weist eine Masse von 50.460 Dalton (40 bis 45 kDa durch SDS-PAGE) auf. Protein A/G ist nicht so pH-abhängig wie Protein A allein, hat aber ansonsten die additiven Eigenschaften von Protein A und G. Protein A/G bindet an alle humanen IgG-Unterklassen und ist somit die ideale Wahl zur Aufreinigung polyklonaler und monoklonaler IgG-Antikörpern, deren Unterkategorie nicht bestimmt wurde.

Pierce Protein A/G Plus-Agarose wird mit Thermo Scientific AminoLink Kopplungschemie vorbereitet, was im Vergleich zu traditionellen Methoden der Ligandenimmobilisierung mehrere Vorteile bietet. Bei der AminoLink-Immobilisierung entsteht über einfache Amidbindungen eine Konjugation zwischen Zuckermonomeren des Agarosegranulats und den nativen Lysin-Resten auf dem Protein A. Im Gegensatz zur herkömmlichen Immobilisierung mit Cyanbromid (CNBr) werden durch die AminoLink-Methode keine neuartigen chemischen Gruppen eingebracht, die zu unerwünschten unspezifischen Bindungen führen könnten, und es wird eine stabile und weitgehend irreversible Bindung erzeugt. Das Ergebnis ist ein Harz mit hohem Bindungsvermögen, das auch nach mehreren Durchgängen der Antikörperreinigung funktionelles immobilisiertes Protein A/G enthält.

Merkmale der vernetzten 6%igen gekörnten Agarose (CL-6B):
• Unterstützung der pH-Stabilität: 2 bis 14 (kurzfristig); 3 bis 13 (langfristig)
• Durchschnittliche Partikelgröße: 45 bis 165 Mikrometer
• Ausschlussgrenze: 10.000 bis 4.000.000 Dalton
• Maximale volumetrische Durchflussrate: Ca. 1 ml/Minute (für Säulendurchmesser 1 cm)
• Maximale lineare Geschwindigkeit: 30 cm pro Stunde
•Maximaler Druck: weniger als 25 psi (1,5 bar), definiert als der maximale Druckabfall in einer Säule, dem das Harz standhalten kann (Hinweis: Der Druckmesser eines Flüssigkeitschromatographen zeigt möglicherweise den gesamten Systemdruck statt des Druckabfalls in der Säule an).

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