EZ-Link™ NHS-SS-PEG4-Biotin

Thermo Scientific EZ-Link NHS-SS-PEG4-Biotin enthält in seinem Spacerarm Disulfid- und Polyethylenglycolgruppen (PEG), die eine spaltbare und löslichkeitsverbessernde Biotinylierung ermöglichen.

Merkmale von EZ-Link NHS-SS-PEG4-Biotin:

• Proteinmarkierung—Biotinylierter Antikörper oder andere Proteine für den Nachweis oder die Aufreinigung mit Streptavidinsonden oder Harzen
• Aminreaktiv—reagiert mit primären Aminen (-NH2) wie z. B. der Seitenkette von Lysinen (K) oder den Aminotermini von Polypeptiden
• Spaltbar—Die Disulfidbindung im Spacerarm ermöglicht das Entfernen der Biotinmarkierung mit Reduktionsmitteln wie DTT; nur eine kleine Thiolgruppe verbleibt am Molekül
• Pegyliert—Der Spacerarm enthält eine hydrophile 4 E Polyethylenglycolgruppe (PEG)
• Bessere Löslichkeit—Pegylierung verleiht dem biotinylierten Molekül Wasserlöslichkeit, was verhindert, dass in der Lösung befindliche biotinylierte Antikörper aggregiert werden.
• Lange Reichweite—Die Länge des Spacerarms (zum Target hinzugefügte Gesamtlänge) beträgt 37,9 Angström; dies reduziert die sterische Hinderung bei der Bindung an Avidin-Moleküle.

NHS-SS-PEG4-Biotin ermöglicht eine einfache und effiziente Biotinmarkierung von Antikörpern, Proteinen und anderen primären aminhaltigen Makromolekülen. Die N-Hydroxysuccinimid-Ester-Gruppe (NHS-Ester) reagiert bei pH-Wert 7 bis 9 spezifisch und effizient mit Protein- und Peptidlysin-Aminogruppen (K) und N-terminalen Aminogruppen und bildet so stabile Amidbindungen. Der hydrophile Polyethylenglykol (PEG)-Spacerarm gewährleistet die Wasserlöslichkeit, die auf das biotinylierte Molekül übertragen wird, wodurch die Aggregation markierter Proteine in der Lösung reduziert wird. Die inhärente Disulfidbindung ermöglicht die Trennung der Biotingruppe vom markierten Molekül mithilfe von DTT oder anderen Reduktionsmitteln und sorgt so für eine effiziente Rückgewinnung Avidin-gebundener Proteinkomplexe in affinitätsbasierten Assays.

Unsere Biotinreagenzien sind auf höchstmögliche Produktintegrität, -konsistenz und -leistung in den entsprechenden Forschungsanwendungen ausgerichtet.

N-Hydroxysulfosuccinimid (NHS) Ester von Biotin sind die beliebtesten Biotinylierungsreagenzien. NHS-aktivierte Biotine reagieren effizient mit primären Aminogruppen (-NH2) in alkalischen Puffern und bilden stabile Amidbindungen. Proteine (z. B. Antikörper) haben in der Regel mehrere primäre Amine, die als Kennzeichnungsziele zur Verfügung stehen, einschließlich der Seitenkette von Lysinrückständen (K) und des N-Endterminus jedes Polypeptids.

Biotinvielfalt NHS-Ester unterscheiden sich in Länge, Löslichkeit, Zelldurchlässigkeit und Spaltbarkeit. Nicht sulfonierte NHS-Biotine sind zellpermeabel, müssen jedoch in einem organischen Lösungsmittel wie DMSO oder DMF gelöst werden. Sulfo-NHS-Biotine (und solche mit pegyliertem Spacer) sind direkt wasserlöslich, können jedoch nicht die Zellmembran durchdringen. Varianten mit Disulfidbrücken können mithilfe von Reduktionsmitteln gespalten werden, sodass die Biotin-Gruppe vom markierten Protein getrennt werden kann.