PEG4-SPDP (PEGylated, long-chain SPDP crosslinker)

Thermo Scientific Pierce PEG4-SPDP ist ein multifunktionaler Crosslinker für die Proteinkonjugation über Amin-Amin- oder Amin-Sulfhydryl-Vernetzungen, der eine Polyethylenglykol-Gruppe (PEG) aus 4 Einheiten und eine reduzierbare (spaltbare) Disulfidbindung enthält.

Merkmale von PEG4-SPDP:

• Effiziente Aminkonjugation – der NHS-Ester sorgt für eine effektive Konjugation zu Lysinen, N-Termini von Peptiden und anderen primären Aminen
• Reversible Sulfhydrylkonjugation – die Pyridyldithio-Gruppe ermöglicht eine Disulfid-Verbindung mit reduzierten Cysteinen und anderen Sulfhydrylgruppen und sorgt so für eine stabile, aber spaltbare Bindung
• Polyethylenglykol – die PEG-Gruppen sind flexibel, nicht immunogen, hydrophil und erhöhen häufig die Löslichkeit der gebundenen Moleküle
• Spacerarm – verbindet primäre Amine und Sulfhydryl-Ziele bei Entfernungen von bis zu 25,7 Ångström; im Vergleich zu PEG12-SPDP (54,1 Ångström)

SPDP-Reagenzien haben an einem Ende einen aminreaktiven N-Hydroxysuccinimid (NHS)-Ester und am anderen Ende eine Sulfhydryl-reaktive 2-Pyridyldithio-Gruppe. PEG4-SPDP verfügt über einen Polyethylenglykol-Spacerarm aus 4 Einheiten, der dem Crosslinker und den verknüpften Proteinen gegenüber Crosslinkern, die nur Spacer aus Kohlenwasserstoffen aufweisen, eine größere Löslichkeit verleiht. Pyridyldithiol-Reagenzien erzeugen disulfidhaltige Verbindungen, die mit Reduktionsmitteln wie Dithiothreitol (DTT) gespalten werden können. Vernetzungsexperimente mit SPDP-Reagenzien sind nicht auf solche mit Proteinen beschränkt. Jedes einer Vielzahl von Molekülen mit primären Aminen und Sulfhydrylgruppen kann mit einem SPDP-Reagenz modifiziert oder vernetzt werden.

Die Reaktionen zur Konjugation von SPDP-Reagenzien an primäre Amine über den NHS-Ester werden gewöhnlich bei pH 7 bis 8 in Phosphat-, Carbonat/Bicarbonat- oder Borat-Puffer durchgeführt. Andere Puffer, die keine primären Amine enthalten (oder Thiole oder Disulfid-Reduktionsreagenzien; siehe die Sulfhydrylreaktivität), sind ebenfalls wirksam.

Die Reaktion mit der Sulfhydryl-reaktiven Pyridyldithio-Gruppe kann mit (gleichzeitig) oder nach der Aminreaktion durchgeführt werden und erfolgt optimal bei pH 7 bis 8. Die Reaktion führt zu einer Pyridin-2-thion-Verdrängung, deren Konzentration durch Messung der Absorption bei 343 nm bestimmt werden kann. Die Reaktionspuffer müssen frei von Thiolen und Disulfid-Reduktionsmitteln sein, bis eine Quenchung oder Reduktion der 2-Pyridyldithio-Gruppe gewünscht wird.

Produktreferenzen:
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