Pierce™ Co-Immunoprecipitation-Kit

Das Thermo Scientific Pierce Co-Immunpräzipitation Kit beinhaltet eine kovalente Antikörperimmobilisierung und alle Komponenten, die für ein ordnungsgemäß kontrolliertes Co-IP-Experiment ohne Antikörperinterferenz im Endprodukt erforderlich sind.

Co-IP ist ein allgemeiner Ansatz für die Untersuchung von Protein-zu-Protein-Interaktionen, bei denen ein Antikörper verwendet wird, um das Antigen (Köderprotein) zu immunpräzipitieren und interagierende Proteine (Beuteproteine) zu koimmunpräzipitieren. Herkömmliche Methoden zur Co-IP verwenden die Proteine A oder G. Dies führt zu einer gemeinsamen Elution der schweren und leichten Antikörperketten, die dann mit relevanten Banden co-migrieren und wichtige Ergebnisse verdecken können. Das Pierce Co-IP Kit behebt dieses Problem, indem Antikörper durch kovalente Kopplung an ein amin-reaktives Harz gebunden werden. Im Lieferumfang des Kits sind folgende Komponenten enthalten: Für die Proteinbindung und -gewinnung optimierte Puffer; Reagenzien zur Durchführung von Kontrollexperimenten sowie effiziente Spin-Säulen und Sammelröhrchen, die das Protokoll verkürzen und Handling und Mischung vereinfachen.

Merkmale des Co-Immunpräzipitationskits:

• Geeignet für jeden aufgereinigten Antikörper—Co-IP-Experimente können mit jedem aufgereinigten Antikörper durchgeführt werden, unabhängig von Spezies oder Ig-Klasse (Hühner-IgY, humanes IgE, Maus-IgG1/IgM usw.) und ungeachtet einer Protein A- und Protein G-Affinitätsbindung
• Keine Antikörper-Interferenzen—Kovalentes Anhängen und nicht-reduzierendes Elutionssystem sorgen für reine Co-IP-Produkte ohne Verunreinigungen durch IP-Antikörper
• Wiederverwendbare Antikörper-Beads—Kovalente Antikörper-Immobilisierung ermöglicht Wiederverwendung des vorbereiteten IP-Harzes und mögliche Einsparungen kostspieliger Antikörper
• Komplettes Kit—Alle Reagenzien für die Antikörper-Immobilisierung und für viele IP-Experimente, darunter Bindungs- und Waschpuffer, Elutionspuffer und praktische Mikrozentrifugensäulen zum einfacheren und effizienteren Umgang mit Harzen.
• Inklusive Kontroll-Beads— Nicht-derivatisierte Agarose-Beads als Negativkontrolle für unspezifische Bindungen im Lieferumfang enthalten
• Vielseitig—Die Co-IP-Methode ist mit jedem physiologischen (nicht-denaturierenden) Proteinprobenpuffer kompatibel, der mit dem spezifischen Antigen-Antikörper- und Protein-Interaktionskomplex kompatibel ist.

Die Co-Immunpräzipitation (Co-IP) ist eine beliebte In-vitro-Methode zur Erkennung von Proteininteraktionen. Das PierceCo-Immunoprecipitation Kit bietet die grundlegenden Werkzeuge für effektive Co-IP-Experimente, die präzipitierte und kopräzipitierte Produkte ergeben, die frei sind von lästigen IP-Antikörpern. Diese Verbesserung im Vergleich zur traditionellen Co-IP-Methode wird erzielt, indem Agarose-Beads mit Protein-A/G durch AminoLink Plus-Harz ersetzt werden, an das reine IP-Antikörper dann direkt und dauerhaft konjugiert werden können. Sanfte (nicht reduzierende und nicht denaturierende) Elutionspuffer ermöglichen die Dissoziation der IP-Ziele unter Beibehaltung der immobilisierten Antikörper auf den Agarose-Beads. Das Ergebnis ist ein reines Produkt, das ohne Antikörper-Interferenzen mittels Western-Blot (oder auch sequenziert) analysiert werden kann.

Neben der Beseitigung von Kontamination durch IP-Antikörper werden durch die Methode mit Antikörper-Konjugation, auf der das Pierce Co-IP Kit basiert, unspezifische Bindungen und ein Auslaugen, das bei traditionellen Verfahren mit Protein A und Protein G auftreten kann, verhindert. Die Konjugationsmethode erfordert zwar, dass Antikörper am Anfang in einem aminfreien Puffer ohne BSA, Gelatine oder anderen Speicherproteinstabilisatoren vorliegen müssen; da das Verfahren jedoch unabhängig von Protein A oder Protein G ablaufen kann, können alle Spezies oder Klassen von Antikörpern für die Immunpräzipitation verwendet werden (z. B. auch IgM und Hühner-IgY). Tatsächlich kann jedes gereinigte Protein kann für den Einsatz in der Affinitätsreinigung von Bindungspartnern immobilisiert werden.