M-MLV Reverse Transkriptase ist eine rekombinante DNA-Polymerase, die aus einsträngiger RNA, DNA oder einem RNA:DNA-Hybrid einen DNA-Komplementärstrang synthetisiert. Im Vergleich zu AMV RT besitzt Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transkriptase (M-MLV RT) nur eine geringfügige Aktivität von DNA-Endonuklease und RNase H. Merkmale dieses Enzyms:

• Thermostabilität – optimale Aktivität bei 37 °C
• cDNA-Größe – M-MLV kann zum Synthetisieren von Erststrang-cDNA bis zu 7 kb eingesetzt werden
• Anwendungen – Synthese von Erststrang-cDNA, Primer-Verlängerung, Sequenzierung von dsDNA, cDNA-Bibliotheken und RT-PCR

Quelle
Aufgereinigt aus E. coli, das das pol-Gen von M-MLV auf einem Plasmid exprimiert

Wirkungs- und Qualitätskontrolle
SDS-PAGE-Reinheitsgrad, Endodesoxyribonuklease-, Exodesoxyribonuklease- und Ribonuklease-Assays sowie Ausbeute und Länge von cDNA

Definition einer Einheit
Eine Einheit von M-MLV-RT ist die Enzymmenge, die benötigt wird, um in 10 Minuten bei 37 °C mit Poly(A)-Oligo(dT)₂₅ als Template/Primer 1 nmol Desoxyribonukleotid in säurefällbares Material einzubauen.

Reaktionsbedingungen pro Einheit
50 mM Tris-HCl (pH 8,3), 40 mM KCl, 6 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 0,5 mM [³H]dTTP, 0,1 mM Poly(A), 0,1 mM Oligo(dT)₂₅, 0,1 mg/ml BSA und Enzym in 50 µl für 10 min bei 37 °C.