Fast SYBR™ Green Cells-to-C_T™ Kit

Das Ambion™ Fast SYBR™ Green Cells-to-C_T™ Kit ist eine schnelle, einfache und sichere Methode für den direkten Wechsel von kultivierten Zellen zu Echtzeit-PCR-Ergebnissen. Eine bahnbrechende Zelllyse- und RNA-Stabilisierungstechnologie eliminiert den mühsamen und zeitaufwändigen RNA-Aufreinigungsprozess vollständig. Das Kit enthält genügend Reagenzien für 400 Reaktionen. Das Fast SYBR™ Green Cells-to-C_T™ Kit enthält AmpliTaq™ Fast DNA Polymerase, UP, die einen sofortigen Hot-Start ermöglicht und so die unspezifische Produktbildung mit schneller Echtzeit-PCR minimiert.

• Enthält optimierte Reagenzien für effizientes Arbeiten direkt nach dem Auspacken
• Die einfache, effektive Cells-to-C_T™-Technologie ermöglicht die Probenvorbereitung bei Raumtemperatur in nur 7 Minuten, einschließlich der DNase-Behandlung
• Validierte Genauigkeit, außergewöhnliche Reproduzierbarkeit und maximale Empfindlichkeit von 10 bis 100.000 Zellen pro Probe; Ergebnisse, die denen aus gereinigter RNA entsprechen

Außergewöhnlicher Preis
Das Kit enthält Reagenzien für die Probenvorbereitung, die in einen vollständigen, optimierten Genexpressions-Workflow integriert sind, einschließlich Reverse-Transkriptionsreagenzien und einem leistungsstarken PCR-Mastermix mit SYBR™ Green.

Außergewöhnlich einfach
Das Protokoll beginnt mit einem einfachen 7-minütigen Probenvorbereitungsverfahren. Zunächst werden die Zellen in PBS gewaschen und dann 5 Minuten lang bei Raumtemperatur lysiert; die DNase-Behandlung kann gleichzeitig erfolgen. Die Lysereaktion wird gestoppt, und die Probe ist dann für reverse Transkription oder Lagerung bei –20 °C über bis zu 5 Monate bereit. Da Proben direkt in Kultur-Wells (96- oder 384-Well) verarbeitet werden können, werden Arbeitsaufwand, Probenverluste oder Transferfehler minimiert, was zu höherer Reproduzierbarkeit führt. Nach der Probenvorbereitung wird ein Teil des Zelllysats einer RT-Reaktion hinzugefügt, gefolgt von einer Echtzeit-PCR unter Verwendung des mitgelieferten Mastermix.

Außergewöhnliche Leistung
Um die Leistung des Kits zu demonstrieren, wurden Replizierungsexperimente entweder mit der herkömmlichen RNA-Aufreinigung und der Echtzeit-PCR-Analyse oder mit dem Fast SYBR™ Green Cells-to-C_T™ Kit durchgeführt. Das Kit zeigt eine vergleichbare Leistung wie die Ergebnisse, die mit gereinigter RNA zur Analyse von 10 bis 100.000 Zellen erzielt wurden. Darüber hinaus erwiesen sich Empfindlichkeit, Effizienz und Dynamikbereich gegenüber Lysat-Kits von Mitbewerbern als überlegen. Die mit dem Kit vorbereiteten Proben wurden auf Kompatibilität mit verschiedenen Echtzeit-PCR-Plattformen getestet, darunter Applied Biosystems™, Roche und Bio-Rad.

Begleitprodukt:
Das SYBR™ Green Cells-to-C_T™ Kontrollkit (SKU-Nr. 4402959) enthält eine Xeno™ RNA-Kontrolle und ein Primer-Set und wird zur Überwachung der Effizienz der Zelllyse und der Amplifikationshemmung in Cells-to-C_T™-Reaktionen empfohlen.