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Applied Biosystems™

MeltDoctor™ HRM Master Mix

Applied Biosystems™ MeltDoctor™ HRM Master Mix enthält alle Komponenten (außer Template und Primern) formuliert für hervorragende HRM Leistung bei einerWeitere Informationen
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KatalognummerMenge
441545010 x 5 ml
440953550 ml
44154405 ml
44154525 x 5 ml
Katalognummer 4415450
Preis (EUR)
5.550,00
Each
Menge:
10 x 5 ml
Preis (EUR)
5.550,00
Each
Applied Biosystems™ MeltDoctor™ HRM Master Mix enthält alle Komponenten (außer Template und Primern) formuliert für hervorragende HRM Leistung bei einer breiten Palette genomischer Targets.High Resolution Melting (HRM)-Analyse wird nach der PCR als Analysemethode zur Identifizierung der genetischen Variation in Nukleinsäuresequenzen angewendet.Im Gegensatz zu einigen anderen Gemischen erfordert MeltDoctor™ HRM Master Mix keine zusätzliche Mischung vor dem Gebrauch und wurde entwickelt und optimiert ausschließlich für HRM-Anwendungen.
•Niedriges Hintergrundfluoreszenzsignal
• Hohe Helligkeit bei doppelsträngiger DNA
• Minimale Temperaturverlagerung des DNA-Meltings aufgrund von Farbstoffanbindung
• Hält PCR-Zyklen dank thermischer Stabilität stand
• Keine Hemmung der Polymeraseaktivität und deshalb hohe PCR-Effizienz
• Eine dNTP-Mischung einschließlich dUTP zur Minimierung von Verschleppungskontaminationen durch Amplikonabbau von Uracil-DNA-Glykosylase (UDG) in nachfolgenden PCR-Reaktionen

Durchführung von Mutationsscans
HRM-Analyse kann für Scans nach Mutationen in Zielgenen zur Identifizierung abweichender Proben vor der Analyse der Sequenzierung angewendet werden.Als eine Mutations-Scantechnik bietet HRM erhebliche Vorteile gegenüber konventionellen Methoden, wie die denaturierende Hochdruckflüssigkeits-Chromatographie (DHPLC) und denaturierende Gradienten-Gelelektrophorese (DGGE).Spezifische Vorteile der HRM-Methode für Mutations-Scans:
• Niedriger Reagenzverbrauch mit wenig Abfall:HRM benötigt nur 20 μl PCR-Reaktion für die Analyse von jeder Probe, wodurch die Notwendigkeit für HPLC-Lösungsmittel oder DGGE-Gels entfällt
• Einfacher, schneller Arbeitsablauf: Nach der PCR-Amplifikation sind keine zusätzlichen Instrumente erforderlich.Ein hochauflösender Schmelzschritt lässt sich einfach am Ende des PCR-Profils zur sofortigen Analyse hinzufügen
• Schnelle Optimierung: Im Gegensatz zu DHPLC ist keine thermische Optimierung erforderlich
• Geringer Probenverbrauch: nach der HRM-Analyse kann das PCR-Produkt direkt in einer Sanger-Sequenzierungsreaktion verwendet werden

Qualitativ hochwertige Komponenten
• Magnesiumsalze und andere Pufferkomponenten, exakt formuliert zur Erzielung optimaler HRM-Ergebnisse.
•AmpliTaq Gold™ 360 DNA-Polymerase, eine hochgradig gereinigte DNA-Polymerase, die für den sofortigen Hot-Start entwickelt wurde, unspezifische Produkte minimiert und Probenvorbereitung bei Raumtemperatur ermöglicht
• MeltDoctor™ HRM Farbstoff, eine stabilisierte Form des fluoreszierenden doppelsträngigen Nukleinsäurefarbstoffs SYTO™ 9, entwickelt von Molecular Probes.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Specifications
Zur Verwendung mit (Geräte)7500 Fast System, 7900HT Fast System, QuantStudio™ 12k Flex, QuantStudio™ 3, QuantStudio™ 5, QuantStudio™ 6 Flex, QuantStudio™ 7, StepOne™, StepOnePlus™, ViiA™ 7 System
GenotypisierungszielSNPs (Unbekannt oder Zahlreich), epigenetische Targets
Anzahl Reaktionen5000 Reaktionen
PolymeraseAmpliTaq Gold 360 DNA-Polymerase
ProduktlinieMeltDoctor
ProdukttypHRM-Mastermix
Menge10 x 5 ml
ProbentypDNA (genomisch), cDNA
VerfahrenHochauflösende Schmelzkurvenanalyse (HRM), Mutations-Scans
Volumen50 ml
NachweisverfahrenHRM
Zur Verwendung mit (Anwendung)Genotypisierung
FormFlüssig
GC-Rich PCR PerformanceHoch
Marker oder FarbstoffHRM (High Resolution Melting)-Farbstoff, SYTO 9
PCR-MethodeqPCR
ReaktionsgeschwindigkeitSchnell
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
Zu den Komponenten des MeltDoctor™ HRM Master Mix, die in einem praktischen 2 x-Gemisch geliefert werden, gehören: AmpliTaq Gold™ 360 DNA-Polymerase, MeltDoctor™ HRM Dye, eine dNTP-Mischung einschließlich dUTP, Magnesiumsalze und anderen Pufferkomponenten, präzise formuliert, um optimale HRM-Ergebnisse zu erzielen.

Bei -15 °C bis -25 °C lagern

Die garantierte Mindesthaltbarkeit beträgt 60 Tage (exaktes Verfallsdatum auf Produkt und COFA).

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

The HRM software will not accept my calibration file. What is wrong?

Check that there are no outliers on the plate. You cannot omit any wells on the HRM calibration plate.

I have a 7900HT Fast Real-Time PCR System, and cannot open the data file in HRM software. What could be causing this?

There are a few possibilities. First, make sure the HRM Software version is v2.0.1, and the 7900HT Fast Real-Time PCR System software version is v2.3 or above. Second, check that the run method used was as recommended in the HRM protocol; make sure the ramp rate for the dissociation stage is 1%. Then try to open the calibration file from the HRM Software; if it does not open, the calibration file is defective. The defects could be due to a bad calibration plate or instrument uniformity issue.

My 7500 Fast Real-Time PCR System has been upgraded to v2.0.6, so why can't I analyze my files with HRM Software v2.0.1?

For the 7500 Fast Real-Time PCR System, if the software version is below v2.0.4, the compatible HRM Software is v2.0.1. If the 7500 Fast Real-Time PCR System has been upgraded to software version 2.0.4 or above, then you will need to get HRM Software version 3.0.1.

How can I get positive controls for the different genotypes for my HRM experiment?

You can order a synthetic positive control plasmid using our GeneArt Gene Synthesis services. The final product is sequence verified and provided as 5 µg of lyophilized plasmid. Alternatively, you may be able to find a positive control sample from Coriell.

How do I perform the HRM calibration on my real-time PCR instrument?

The HRM calibration is a 3-step procedure. In some instrument software, the calibration process has been streamlined to a single-step procedure (applies to the ViiA7 Real-Time PCR System and QuantStudio Real-Time PCR Systems).

For the HRM calibration, the first step is a PCR reaction to generate the HRM dye plate. The reaction plate contains a DNA template, a primer pair, and the PCR mix with HRM dye. The second step is dye calibration using the PCR plate from step 1. The last step is a melt curve run, again using the same plate. For details, please refer to the HRM guides for each instrument:

- 7500 Fast Real-Time PCR System (with software version 1.4 or 2.0.4 and below) (https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/cms_050347.pdf)
- 7500 Fast Real-Time PCR System (with software version 2.0.5 and above) (https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/4457847.pdf)
- 7900HT Real-Time PCR System (https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/cms_050347.pdf)
- StepOne and StepOnePlus Real-Time PCR Systems (https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/4457847.pdf)
- ViiA 7 Real-Time PCR System (https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/4443531.pdf)
- QuantStudio 6 and 7 Real-Time PCR Systems (https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/4489823.pdf)
- QuantStudio 6 and 7 Pro Real-Time PCR Systems (https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/manuals/MAN0018981_HighResolutionMelt_DA_SW_UG.pdf)
- QuantStudio 3 and 5 Real Time PCR Systems (https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/MAN0014394_HighResMeltExperiment_GSG.pdf)
- QuantStudio 12K Flex Real-Time PCR System (https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/4470692A.pdf)

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