Thermo Scientific Pierce Immobilisiertes Ficin besteht aus einer Sulfhydryl-spezifischen Protease (Ficin), die an gekörntem Agaroseharz immobilisiert wurde, um eine kontrollierte Antikörperfragmentierung, insbesondere von Maus-IgG1, zu ermöglichen.

Merkmale von Pierce Immobilisiertem Ficin:

• Kann sowohl Fab- als auch F(ab')2-Fragmente aus Maus-IgG1 erzeugen
• Die Reaktion kann einfach gesteuert werden
• Antikörperfragmente sind frei von Autoverdauungsprodukten
• Die Ficin-Kontamination in Antikörperfragmenten wird eliminiert

Ficin, das Papain ähnelt, ist eine unspezifische, aus Feigenlatex isolierte Sulfhydryl-Protease. Das Molekulargewicht von Ficin beträgt ungefähr 25.000. Es ist bei einem pH-Wert von 4 bis 9,5 wirksam, wobei ein pH-Wert von 6,5 optimal ist. Wenn IgG-Moleküle bei Vorhandensein von Cystein mit Ficin inkubiert werden, werden eine oder mehrere Peptidbindungen in der Hinge-Region gespalten, wodurch entweder Fab-Fragmente oder F(ab')2-Fragmente erzeugt werden. Maus-IgG1 ist mit Papain oder Pepsin besonders schwer in funktionelle Fab- oder F(ab')2-Fragmente zu verdauen, jedoch sind Ausbeute und Immunreaktivität beim Verdau von Maus-IgG1 mit Ficin besser. Immobilisiertes Ficin wurde speziell für die Spaltung von Maus-IgG1 in Fab- oder F(ab')2-Fragmente entwickelt und ist von Vorteil, da es die Autolyse praktisch eliminiert, die Kontamination einer Probe mit der Protease verhindert und die Kontrolle des Verdaus durch Entfernen von Ficin oder die Kontrolle des Probenflusses über eine immobilisierte Ficin-Säule ermöglicht.

Immobilisiertes Ficin ist stabiler gegen hitzeinduzierte Denaturierung als das freie Enzym. Dadurch bleibt die Aktivität länger erhalten. Das Fab- und F(ab')2-Präparationskit enthält immobilisiertes Ficin, andere notwendige Reagenzien und ein optimiertes Protokoll für den Verdau von Maus-IgG1. Ficin erzeugt IgG1 F(ab')2- und Fab-Fragmente in der Gegenwart von 1 mM Cystein bzw. 10 mM Cystein. Durch Modifikation der Cystein-Konzentration und anderer Verdauungsparameter können zudem Fragmente anderer Arten und Isotypen erzeugt werden.