Zero Blunt™ TOPO™ PCR-Klonierungskit für die Sequenzierung, ohne kompetente Zellen

Das Zero Blunt™ TOPO™ PCR-Klonierungskit für die Sequenzierung bietet eine hocheffiziente, 5-minütige Klonierungsreaktion für die direkte Einführung der Proofreading-Polymerase-amplifizierten PCR-Produkte mit stumpfen Enden in einen Plasmidvektor zur Sequenzierung. Jedes Kit verwendet den pCR™-4Blunt-TOPO™ Vektor mit spezieller Sequenzierung der Primerstellen, die bei jeder Reaktion mehr Insertsequenz und weniger Vektorsequenz ergeben. Diese Kits enthalten alle notwendigen Werkzeuge zur Klonierung und Selektion rekombinanter Vektoren, die das PCR-Fragment Ihrer Wahl enthalten.

• Schnell und praktisch: Von der PCR zum Klon in nur drei Schritten und 5 Minuten
• Effizient: Bis zu 95 % der Klone mit dem korrekten Insert
• Bewährt: Zuverlässige Leistung seit über einem Jahrzehnt mit über 20.000 Referenzen
• Einfach: Keine Ligase, Post-PCR-Verfahren oder PCR-Primer bestimmter Sequenzen erforderlich
• Genau: Zur Verwendung mit High-Fidelity-DNA-Polymerasen ist kein A-Überhang am PCR-Produkt erforderlich

pCR™4Blunt TOPO™ Vektor: Optimiert für die Sequenzierung
Der pCR™4Blunt TOPO™ Vektor besitzt eine minimierte multiple Klonierungsstelle (MCS) und somit eine kürzere Distanz zwischen den Bindungsstellen der Sequenzierprimer und dem Insert (ab 33 bp). Dadurch ergeben die Sequenzierreaktionen weniger Vektorsequenz und mehr Insertsequenz. Der pCR™4Blunt™ TOPO Vektor bietet Bindungsstellen für 4 Standard-Sequenzierungsprimer: M13 forward, M13 reverse, T7 und T3. Davon enthalten die Kits je einen Aliquot.

pCR™4Blunt TOPO™ Klon-Selektion und -Manipulation
Der pCR™4Blunt TOPO™ Vektor enthält Ampicillin- und Kanamycin-Resistenzmarker und eine LacZα-ccdB-Genfusion für eine Positivselektion. Die verkürzte multiple Klonierungsstelle des Vektors umfasst flankierende EcoRI-Schnittstellen für eine vereinfachte Exzision klonierter PCR-Produkte und eine einzelne Sse8387I-Stelle für Nested Deletions vor der Sequenzierung. T7- und T3-Promoter sind auch für die In-vitro-Transkription vorhanden.

Vereinfachte TOPO™-basierte Klonierung
Mit dem TOPO™-Verfahren sind für die Klonierung weder PCR-Primer mit spezifischen integrierten Sequenzen, noch Post-PCR-Verfahren, eine Vektorpräparation oder andere zeitintensive Schritte zur DNA-Manipulation erforderlich. Geben Sie Ihre PCR-Reaktion einfach zum mitgelieferten Vektor mit gebundener Topoisomerase, warten Sie 5 Minuten, und führen Sie die Transformation in kompetente E. coli-Zellen durch.

Effiziente Klonierung
Mit bis zu 95 % der Klone, die das gewünschte Insert tragen, können Sie das Screening der Klone reduzieren, was Zeit und Geld spart. Der pCR™-4Blunt-TOPO™ Vektor hat keine Überhänge für eine effiziente Ligation von PCR-Produkten, die durch thermostabile Proofreading-Polymerasen, PCR-Produkte mit stumpfem Ende generieren.

Das am häufigsten verwendete Klonierungskit
Bei der Klonierung ist das TOPO™ Verfahren seit über zehn Jahren für Tausende von Wissenschaftlern ein verlässlicher Partner. Die schnelle, einfache und effiziente TOPO™ Klonierung kam bereits bei einer Vielzahl von Vektoren und in unterschiedlichsten Anwendungen zum Einsatz.

Kit-Optionen: Zero Blunt™ TOPO™ PCR-Klonierungs-Kit für die Sequenzierung
Das Zero Blunt™ TOPO™ PCR-Klonierungs-Kit für die Sequenzierung ist mit einer Vielfalt kompetenter Zellen erhältlich, die verschiedene Vorteile gemäß Ihren Anforderungen bieten:
• Allgemeine Klonierung: Top10-Zellen (Kat.-Nr. K2875-J10, K2875-20, K2875-40)
• Hocheffiziente Klonierung: TOP10 Electrocomp™ Zellen (Kat.-Nr. K2880-20, K2880-40)
• Klonierung allgemein, Resistenz gegen Bakteriophagen T1: DH5α-T1R (Kat.-Nr. K2895-20)
• Schnelles Wachstum: Mach1™-T1R chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. K2835-20)• Ihre eigenen Zellen (Kat.-Nr. 450031, 450159)