Zero Blunt™ TOPO™ PCR Klonierungskit, ohne kompetente Zellen (Kat.

Das Zero Blunt™ TOPO™ PCR-Klonierungskit bietet eine äußerst effiziente, 5-minütige Klonierungsstrategie („TOPO™-Klonierung“) in einem Schritt für die direkte Einführung von PCR-Produkten mit stumpfem Ende, die mit thermostabilen Proofreading-Polymerasen in einem Plasmidvektor verstärkt werden. Jedes Kit enthält den Zero Blunt™ TOPO™ Vektor (siehe Abbildung) mit dem Gen ccd-B für Positivselektion, das nur Wachstum von rekombinanten Plasmidvektoren zulässt. Zero™ Blunt™ TOPO™ Kits sind, je nach Ihren Anforderungen und Ihrem Budget, mit einer Vielzahl an kompetenten Zellen oder auch ohne kompetente Zellen erhältlich. Merkmale der Zero™ Blunt™ TOPO™ PCR Klonierungskits:

Schnell und praktisch: Von der PCR zum Klon in nur 3 Schritten und 5 Minuten
Effizient: Bis zu 95 % Klone mit dem korrekten Insert
Bewährt: Zuverlässige Leistung seit mehr als zehn Jahren und über 4.000 Referenzen
Einfach: Keine Ligase, Post-PCR-Verfahren oder PCR-Primer mit spezifischen Sequenzen sind erforderlich.

Zero Blunt™ TOPO™ Klonierungskit – Überblick

Vektor: pCR™-Blunt II-TOPO™ Vektor: Enthält das ccd-B-Gen und ermöglicht die direkte Auswahl der Rekombinanten

Klonierungsmethode: TOPO™ Klonierung: Ligation von PCR-Produkten mit stumpfem Ende auf Basis von Topoisomerase I verstärkt mit thermostabilen Proofreading-Polymerasen in 5 Minuten

Kompetente Zellen: Verschiedene Optionen: Wählen Sie entweder aus den Kits mit allgemeinen, hocheffizienten, bakteriophagen T1-beständigen, schnell wachsenden kompetenten Zellen oder verwenden Sie Ihr eigenes.

pCR™-Blunt II-TOPO™ Vektor: Entwickelt für Proofreading-Polymerasen
Der pCR™-Blunt II-TOPO™ Vektor ist für das Klonen von PCR-Produkten mit stumpfem Ende, die durch thermostabile Proofreading-Polymerasen wie Platinum™ Pfx DNA-Polymerase generiert werden, ausgelegt. Der pCR™Blunt II-TOPO™ Vektor enthält:

• EcoRI-Stellen zu beiden Seiten der Insertionsstelle des PCR-Produkts ermöglichen die problemlose Exzision von Inserts
• Kanamycin- und Zeocin-Resistenzgene für Ihre Auswahl an E. coli
• SP6-Promoter-/Primer-Stelle für In-vitro-RNA-Transkription und Sequenzierung
• M13-Vorwärts- und Rückwärtsprimer-Stellen für die Sequenzierung oder PCR-Screening

pCR™-Blunt II-TOPO™ Klonselektion
pCR™-Blunt II-TOPO™ ermöglicht die direkte Selektion von Rekombinanten durch Trennung des letalen E. coli-Gens ccdB. Der Vektor enthält das Gen ccdB, das mit dem C-Terminus des LacZα-Fragments fusioniert. Die Ligation eines PCR-Produkts mit stumpfem Ende unterbricht die Expression der LacZα-ccdB-Genfusion, wodurch nur das Wachstum von positiven Rekombinanten nach der Transformation ermöglicht wird. Zellen, die einen nicht rekombinanten Vektor enthalten, werden nach dem Auftragen auf Platten abgetötet. Daher ist ein Blau-Weiß-Screening nicht erforderlich.

Vereinfachte TOPO™-basierte Klonierung
Mit dem TOPO™-Verfahren sind für die Klonierung weder PCR-Primer mit spezifischen integrierten Sequenzen, noch Post-PCR-Verfahren, eine Vektorpräparation oder andere zeitintensive Schritte zur DNA-Manipulation erforderlich. Geben Sie Ihre PCR-Reaktion einfach zum mitgelieferten Vektor mit gebundener Topoisomerase, warten Sie 5 Minuten, und führen Sie die Transformation in kompetente E. coli-Zellen durch.

Effiziente Klonierung
Mit bis zu 95 % der Klone, die das gewünschte Insert tragen, können Sie das Screening der Klone reduzieren, was Zeit und Geld spart. Der in diesem Kit verwendete pCR™ Blunt II-TOPO™ Vektor wird mit einem letalen Gen ccdB geliefert, das eine effiziente Auswahl an Produkten mit stumpfen PCR-Rekombinanten ermöglicht, die durch thermostabile Proofreading-Polymerasen erzeugt werden.

Der Standard in der Klonierung
Bei der Klonierung ist das TOPO™ Verfahren seit über zehn Jahren für Tausende von Wissenschaftlern ein verlässlicher Partner. Die schnelle, einfache und effiziente TOPO™ Klonierung kam bereits bei einer Vielzahl von Vektoren und in unterschiedlichsten Anwendungen zum Einsatz.

Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning™ Kit-Optionen
Das Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit zur direkten Einführung von PCR-Produkten mit stumpfem Ende in einen Plasmidvektor kann, je nach Bedarf, mit einer Vielzahl kompetenter Zellen, die sich durch unterschiedliche Vorteile auszeichnen, gekauft werden:

Allgemeine Klonierung: Top10-Zellen (Kat.-Nr. K2800-20, K2800-40)
Hocheffiziente Klonierung: TOP10 Electrocomp™ Zellen (Kat.-Nr. K2860-01, K2860-40)
Klonierung allgemein, Resistenz gegen Bakteriophagen T1: DH5α-T1R (Kat.-Nr. Nr. K2820-20, K2820-40)
Schnelles Wachstum: Mach1™-T1R chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. K2830-20)
Stellen Sie Ihre eigenen Zellen bereit: Mehr Flexibilität und Kosteneffizienz (Kat.-Nr. Nr. 450254)

Wir bieten auch eine Version des Kits mit PureLink™ Quick Plasmid-Miniprep-Kit (Kat.-Nr. K2800-02), entwickelt zur Isolierung eines sauberen, sequenzierungsbereiten, rekombinanten Plasmids.