BOVIGAM™ Mycobacterium bovis Interferon-gamma Test System for Cattle

BOVIGAM™ Testsystem für Rinder ist ein in vitro Diagnostikum zum Nachweis von Tuberkulose bei Rindern. BOVIGAM ist ein in vitro Testsystem für Vollblut zum Nachweis der zellvermittelten Immunantwort auf M. bovis PPD (Purified Protein derivative) Tuberkulin und dient zur Diagnose einer M. bovis Infektion bei Rindern. Das Testsystem besteht aus dem BOVIGAM und den folgenden Stimulationskomponenten: Bovine Tuberkulin PPD 3000 und Avian Tuberkulin PPD 2500 sowie Pokeweed Mitogen, einer Kontrolle für die Stimulierbarkeit des Vollblutes.

Das BOVIGAM Test System für Rinder beinhaltet:

• BOVIGAM™ Kit, 10 Platten (63320)
• Bovine Tuberculin PPD 3000, 5 mL (7600060)
• Avian Tuberculin PPD 2500, 5 mL (7600065)
• BOVIGAM™ Pokeweed Mitogen (5108777)

Das Testprozedere

Stimulation
Tuberkulin PPD Antigene werden in einer Vollblutkultur (Stimulation) den Lymphozyten präsentiert. Vitale Lymphozyten von M. bovis-infizierten Tieren reagieren auf PPD Antigen-Stimulation und produzieren IFN-γ (spezifische Immunantwort). Lymphozyten von nicht infizierten Tieren produzieren kein IFN-γ wenn sie mit PPD Antigenen stimuliert werden. Daher korreliert der Nachweis von IFN-γ mit einer M. bovis Infektion. Die IFN-γ Produktion von den Zellen wird dann mit Hilfe eines auf monoklonalen Antikörpern basierenden Sandwich-Enzym gekoppelten Immunadsorptionstestes (EIA) nachgewiesen. Um die Vitalität der Lymphozyten in der Vollblutprobe zu überprüfen, wird mit Pokeweed Mitogen stimuliert. Pokeweed ist ein Lektin, das aus der Pflanze Phytolacca americana gewonnen wird und als Mitogen auf T- und B-Zellen wirkt. Lebende Zellen reagieren auf eine Pokeweed Stimulation mit der Ausschüttung von IFN-γ.

ELISA
1. Mikrotiterplatten sind mit Antikörpern beschichtet, die gegen IFN-γ gerichtet sind.
2. Testproben werden auf die beschichteten Platten gegeben. Wenn IFN-γ in der Probe vorhanden ist, wird dieses durch die Antikörper gebunden und bildet dadurch einen Antikörper-Antigenkomplex.
3. Nach dem Waschen wird ein Anti-IFN-γ HRP gekoppeltes Konjugat hinzugegeben.
4. Ungebundenes Konjugat wird weggewaschen und das Chromogen Substrat hinzugegeben.
5. Eine Blaufärbung ist die Konsequenz der Substratoxidierung durch die Konjugat-Peroxidase.
6. Nach Hinzugabe der Stopplösung wechselt die Farbe von blau nach gelb.
7. Auswertung erfolgt auf einem ELISA Reader bei einer Wellenlänge von 450 nm. Die gelbliche Färbung ist proportional zur Menge des Konjugat-Antikörpers.

Für tierärztlichen Gebrauch.
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