Imject™ mcKLH (in PBS)

Thermo Scientific Imject Marikultur-KLH ist ein gereinigtes KLH-Trägerprotein (Keyhole Limpet Hemocyanin), das eine einfache Vorbereitung hochwirksamer Immunogene mit Peptid-Antigenen ermöglicht.

Merkmale von Imject Marikultur-KLH:

• Konjugation mit hoher Ausbeute – jedes KLH-Molekül enthält Hunderte primärer Amine, die für die Kopplung von Hapten über EDC- oder NHS-Ester-Crosslinker verfügbar sind
• Validierte Qualität – gereinigtes und stabilisiertes Marikultur-KLH behält, im Gegensatz zu herkömmlichen Quellen des Trägerproteins, die Löslichkeit in wässrigen Lösungen bei
• Nachhaltige Quelle—– KLH wird aus ausgewählten Populationen der Molluske Megathura crenulata (Schlüssellochschnecke) gewonnen, die in Marikultur gezüchtet werden, und nicht aus Wildpopulationen extrahiert
• Hoch immunogenKLH hat ein hohes Molekulargewicht (4,5 x 10⁵ bis 1,3 x 10⁷ Dalton; Aggregate aus 350 und 390 kDa-Untereinheiten) und löst eine stärkere Immunantwort aus als BSA oder Ovalbumin

KLH ist das beliebteste und immunogenste Trägerprotein zur Vorbereitung von Peptid-Antigenen für die Immunisierung und Antikörperproduktion. KLH-Zubereitungen in Phosphatpuffer sind gebrauchsfertig für die Konjugation von Hapten und Trägerprotein über aminreaktive NHS-Ester- oder Glutaraldehyd-Crosslinker. Die Zubereitungen in MES-Puffer wurden für die Konjugation von Peptid und Trägerprotein über carboxylreaktive Carbodiimid-Crosslinker (EDC oder auch EDAC genannt) optimiert.

Trägerproteine sind große, komplexe Moleküle, die nach einer Injektion eine Immunantwort auslösen. Wenn Antikörper hergestellt werden sollen, die spezifisch auf kleine Antigene (z. B. Peptide oder Arzneimittelverbindungen) reagieren, dann müssen diese Haptene kovalent an ein größeres, komplexeres Molekül (in der Regel ein Protein) gebunden (konjugiert) werden, um ihnen eine immunogene Wirkung zu verleihen. Die Wahl des Trägerproteins beruht auf der Immunogenität, der Löslichkeit und der erfolgreichen, ausreichenden Konjugation mit dem Trägerprotein.

Keyhole Limpet Hemocyanin (KLH) wird in der Antikörperherstellung häufig als Trägerprotein zur Konjugation von Haptenen und anderen Antigenen verwendet, um deren Immunogenität zu verbessern. Dank seiner großen Masse und seiner Komplexität ruft KLH eine stärkere Immunantwort hervor als andere Trägerproteine. Da das Protein von einem Mollusken stammt, ist es phylogenetisch gesehen von Säugetierarten weit entfernt. Daher ist eine Bildung von Antikörpern, bei denen in Assays eine Kreuzreaktion mit typischen Zielmolekül-Proben beobachtet wird, weniger wahrscheinlich.

Imject Marikultur-KLH (mcKLH) ist KLH, das aus in Marikultur gezüchteten Schnecken, und nicht aus Wildpopulationen, gewonnen wird. Imject mcKLH bietet die größtmögliche Immunogenität; es wurde aufgereinigt und in Puffern gefriergetrocknet, die für eine optimale Stabilität und Löslichkeit bei Haptenkonjugationen sorgen. Als großes Protein verfügt KLH über Hunderte von primären Aminen und Carboxylgruppen, die für die Konjugation mit NHS-Ester-, EDC- und anderen Crosslinker-Reagenzien zur Verfügung stehen.

Der Carbodiimid-Crosslinker EDC konjugiert Haptene mit Carboxylgruppen (z. B. am C-Terminus des Peptidantigens) mit dem hochimmunogenen KLH-Trägerprotein für die Immunisierung und Antikörperproduktion. Diese Methode der Immunogenzubereitung eignet sich ideal für Peptidantigene mit wenigen oder gar keinen Asparaginsäure- und Glutaminsäureresten (Carboxylaten) und Lysinresten (primäre Amine) im zentralen Teil der primären Sequenz. Da Peptide sowohl Carboxylate als auch Amine enthalten, führt die Konjugation mit EDC zu einer unterschiedlichen Polymerisierung und zufälligen Ausrichtung an den Bindungsstellen am Trägerprotein. Damit wird gewöhnlich nicht nur eine hohe Beladung des Trägerproteins mit Antigen, sondern auch eine Präsentation in alle möglichen Richtungen erreicht, was die Antikörperproduktion fördert. Allerdings ist es möglich, dass wichtige (d. h. erwünschte) Epitope in der Sequenz des Antigenpeptids bei der EDC-vermittelten Konjugation blockiert werden, wenn die betroffenen Regionen primäre Amine (Lysinreste) oder Carboxylate (Asparaginsäure- und Glutaminsäurereste) enthalten. Verwenden Sie in diesen Fällen entweder einen homobifunktionalen aminreaktiven Crosslinker mit dem gereinigten mcKLH in Phosphatpuffer oder synthetisieren Sie das Peptid mit einem einzelnen terminalen Cystein, und verwenden Sie ein Kit mit Maleimid-aktiviertem mcKLH, um das Trägerproteinkonjugat vorzubereiten.

Weitere Produktdaten
• Trägerprotein-Aktivierungs- und Konjugationsdaten zur Immunogenzubereitung

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