Thermo Scientific™ Pierce™ Ni-NTA-Magnet-Agarose-Beads bieten eine schnelle und praktische Methode zur Aufreinigung von rekombinanten His-Tag-Proteinen. Die Beads werden mit Zelllysat inkubiert, das His-Tag-Protein enthält, und anschließend manuell oder automatisiert mit einem Gerät wie dem Thermo Scientific™ KingFisher™ Flex Magnetpartikelprozessor magnetisch vom Überstand getrennt. Protein mit unspezifischer Bindung kann abgewaschen werden, bevor das gebundene His-markierte Protein mit Elutionspuffer abgetrennt wird. Automatisierte Geräte sind besonders für die Aufreinigung mit höherem Durchsatz und das Screening von Aufreinigungsbedingungen nützlich.

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Pierce Ni-NTA-Magnet-Agarose-Beads bestehen aus stark vernetzten Agarosebeads, die in Magnetit eingebettet sind, und einem kovalent gebundenen vierzähnigen Nitrilotriessigsäure (NTA)-Chelator, der mit divalenten Nickelionen geladen ist. Die Dichte des Liganden auf dem Agarose-Magnetbead führt zu einer Bindungskapazität, die mindestens mit der herkömmlicher Agarose-Harze vergleichbar ist, mit dem zusätzlichen Merkmal der magnetischen Handhabung. Magnetische Agarose-Beads sind ein wertvolles Hilfsmittel für die kleinvolumige (∼1 mg) Aufreinigung mehrerer His-Tag-Proteine und für die Suche nach Expressions- und Aufreinigungsbedingungen, die bei Aufreinigungen größerer Volumina mit Agarose-Chromatographie-Trägern verwendet werden können.

Merkmale der Ni-NTA Magnetic Agarose Beads:
• Hohe Kapazität – Ausreichend für routinemäßige und anspruchsvolle Reinigungsverfahren; bindet > 70 mg 6xHis-markiertes Protein pro Milliliter des abgesetzten Harzes
• Leistungsstarke und reproduzierbare Beads – Nicht aggregierende, mit Magnetit (Fe₃O₄) versehene, superparamagnetische Beads bieten eine außergewöhnliche Gleichförmigkeit sowohl für manuelle als auch automatisierte HTS-Aufreinigungsanwendungen
• Geringe unspezifische Bindung – Optimiertes Aufreinigungsprotokoll führt zu einer besseren Aufreinigung von markierten Proteinen
• Vielseitig – Proteinaufreinigung unter nativen oder denaturierenden Bedingungen
• Kompatibel – Kann mit Thermo Scientific Zelllysereagenzien und einer Vielzahl von Pufferadditiven verwendet werden

Das leistungsstarke, magnetithaltige, superparamagnetische Agarose-Harz ist für die Verwendung mit Magnetplattformen mit hohem Durchsatz validiert und optimiert, wie z. B. für KingFisher 96 und KingFisher Flex Magnetpartikelprozessoren. Die Beads ermöglichen jedoch auch eine erstklassige Leistung für einfache Tischaufreinigungsanwendungen mit einem geeigneten Magnetstativ.

Ni-NTA-Magnet-Agarose-Beads werden für die kleinvolumige Affinitätsaufreinigung sowie für das Hochdurchsatz-Screening rekombinanter, His-markierter Proteine verwendet. Die Polyhistidin-Markierung ist die häufigste Affinitätsmarkierung. Sie besteht in der Regel aus sechs aufeinanderfolgenden Histidinresten (6xHis). Markierte Proteine werden in verschiedenen Systemen, vor allem in Bakterien, überexprimiert und aus Zelllysaten wie jenen, die mit Thermo Scientific B-PER Bacterial Protein Extraction Reagenzien hergestellt werden, aufgereinigt. Die Aufreinigung His-markierter Proteine erfolgt mittels eines mit Nickel beladenen NTA-Chelats, das sich koordinativ an die Histidin-Seitenketten anlagert. Das NTA-Chelat umfasst vier Metall-Bindungsstellen, was ein geringes Auslaugen der Metallionen und eine hohe Bindungskapazität ermöglicht. Das Protokoll für Ni-NTA Magnetic Agarose Beads wurde optimiert und ermöglicht dadurch eine hohe Reinheit des isolierten His-Tag-Proteins.