eBioscience™ Mouse Regulatory T Cell Staining Kit #2

Der FJK-16s-Antikörper reagiert mit Maus/Ratte Foxp3, auch als FORKHEAD BOX P3, SCURFIN und JM2 bekannt; die Kreuzreaktivität dieses Antikörpers mit anderen Proteinen wurde nicht bestimmt. Das Protein Foxp3 a 49-55 kDa ist ein Mitglied der Forkhead-/Winged-Helix Familie der transkriptionalen Regler und wurde als das Gen gekennzeichnet, das in den „scurfy“ (sf) Mäusen defekt ist. Die konstitutive hohe Expression von Foxp3 mRNA wurde in den regulatorischen T-Zellen CD4+CD25+ (Treg-Zellen) gezeigt, und die ektopische Expression von Foxp3 in CD4+CD25-Zellen verleiht diesen Zellen einen Treg-Phänotyp.

Immunblotting mit dem FJK-16s Antikörper hat das Epitop den Aminosäuren 75-125 des Maus Foxp3 Proteins zugeordnet. Beim Menschen hat sich gezeigt, dass diese Region alternativ auf mRNA-Ebene gespleißt wird. Sowohl die wechselseitig gespleißten als auch die nicht gespleißten Isoformen sind in der CD4+CD25+ Teilmenge der Lymphozyten vorhanden. Vorläufige RT-PCR-Experimente haben diese wechselseitig gespleißte Isoform in Mäusesplenozyten nicht offenbart, was auf eine unterschiedliche Genregulation in der Maus und beim Menschen hindeutet.

Die intrazelluläre Färbung von Maus-Splenozyten mit FJK-16s mit den Maus-Foxp3-Färbesätzen und dem Protokoll zeigt etwa 2 % der gesamten Splenozyten im C57Bl/6-Stamm und etwa 3-5 % im BALB/c-Mausstamm. Die mehrfarbige zytometrische Durchflussanalyse zeigt etwa 90 % der CD4+CD25+-Zellen und 4 % der CD4+CD25- Zellen, die mit FJK-16s färben. B220+-, CD11b+-, CD11c+- und Ly6G/Gr-1+ Zellen zeigen keine signifikante Kofärbung mit FJK-16s. Diese Daten stehen im Einklang mit einem kürzlich veröffentlichten Bericht, der der Expression von Foxp3 mit einem GFP-Knock-in folgt (Fontenot et al., 2005).

FJK-16s kreuzreagiert mit Ratten-Foxp3. Dies wurde durch intrazelluläre Färbung von Foxp3 und Durchflusszytometrie von Rattensplenozyten mit demselben Verfahren und denselben Reagenzien wie für Mausgewebe nachgewiesen. Bitte beachten Sie, dass die in diesem Kit enthaltenen CD4- und CD25-Antikörper nur die Mausantigene erkennen. Zum Färben von Rattengewebe verwenden Sie bitte CD4 FITC (Kat.-Nr. 11-0040) und CD25 PE (Kat.-Nr. Nr. 12-0390)

Der Anti-Maus Foxp3 Färbekit wurde für die Färbung von Mäuse-Splenozyten mit dem monoklonalen FJK-16s-Antikörper formuliert und optimiert.

Nicht im Lieferumfang enthalten:
Isotypkontrollen für Anti-CD4 (Ratte IgG2a, Kat. Nr. 11-4321) und Anti-CD25 (Ratte IgG1, Kat. Nr. 12-4301)

Wirt
Ratte

Isotyp
IgG2a

Reaktivität/Spezies
Maus

Berichtete Anwendung
Intrazelluläre Färbung gefolgt von durchflusszytometrischer Analyse