DNase I-Lösung (1 Einheit/μl), RNase-frei

Thermo Scientific DNase I entfernt unerwünschte DNA aus Zelllysaten, um die Effizienz der Proteinextraktion zu verbessern.

Merkmale von RNase-freier DNase I:

• Baut unerwünschte DNA aus Proben ab und beseitigt diese
• Spaltet sowohl einzel- als auch doppelsträngige DNA
• Kompatibel mit Thermo Scientific Pierce Zelllysereagenzien
• Verringert die Viskosität bakterieller Lysate (Proteinextrakte), was das Pipettieren erleichtert

Desoxyribonuklease I (DNase I) ist ein einzelnes, glycosyliertes Polypeptid, das unerwünschte einzel- und doppelsträngige DNA abbaut. Dazu spaltet das Enzym die DNA in 5' Phosphodinukleotide und kleine Oligonukleotid-Fragmente auf. DNase I ist ein gängiger Zusatz für Zelllysereagenzien, um der durch die DNA verursachten Viskosität in bakteriellen Zelllysaten entgegen zu wirken; darüber hinaus werden die im Rahmen der In-vitro-Transkription erzeugten DNA-Templates aus RNA entfernt. RNase-freie DNase ist für jede Anwendung nützlich, die den Verdau von DNA erfordert, bei der es entscheidend ist, eine Beschädigung der RNA zu vermeiden.

Allgemeine Informationen zur Verwendung von DNase I:

• Für die Aktivität von DNase I werden Calciumionen benötigt. Unter Umständen liegen Spuren von Ca in ausreichender Menge für die DNase-Aktivität vor, doch der Gebrauch von EGTA oder Puffern ohne Calcium kann die DNase I-Aktivität auf ein nicht mehr nachweisbares Niveau reduzieren.
• Hohe Konzentrationen (d. h. 100 mM) monovalenter Ionen wie Na+ und K+ verringern die DNase I-Aktivität
• DNase I wird durch 10 Minuten langes Erwärmen auf 65 °C inaktiviert
• Kunitz-Einheit: 1 Kunitz-Einheit ist als die Enzymmenge definiert, die für einen Anstieg von 0,001 A260nm/min/ml bei 25 °C in 0,1 M NaOAc (pH-Wert 5,0) aufgrund des Abbaus hochgradig polymerisierter DNA benötigt wird.
• Einheiten des Degradationsassays: 1 Einheit ist als die Enzymmenge definiert, die erforderlich ist, um 1 µg Plasmid-DNA in 10 Minuten bei 37 °C in 10 mM Tris·HCl (pH-Wert 7,5), 50 mM MgCl₂, 13 mM CaCl₂vollständig abzubauen.

Spezifikationen:

• Menge: 1000 Einheiten (1 ml)
• Konzentration: 1 Einheit/µl±20 %
• Einheitendefinition: 1 Einheit baut 1 µg Plasmid-DNA in 10 Minuten bei 37 °C vollständig ab. Eine DNase I-Einheit entspricht 0,3 Kunitz-Einheiten.
• RNase-Kontamination: Keine Ribonuklease-Aktivität nachweisbar, basierend auf Inkubation mit RNA-Transkript.
• Quelle: E. coli mit geklontem Gen, das die Rinder-DNase I kodiert
• Molekulargewicht: Ca. 29.000
• Formulierung: Rinder-DNase I in 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM CaCl₂, 50 % Glycerin
• Lieferung mit: 1 ml 10x Reaktionspuffer 100 mM Tris-HCl (pH 7,5), 25 mM MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 50 mM EDTA

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