Tryptic Digestion Kits

Die genaue Identifizierung und Analyse von Proteinen ist ein zentraler Bestandteil proteomischer Strategien zur Untersuchung zellulärer Funktionen und Prozesse. Mit Massenspektrometrie lassen sich Proteine und relevante posttranslationale Modifikationen genau identifizieren. Allerdings hängt die Methode in hohem Maße von der Qualität der Probenvorbereitung ab. Thermo Scientific Pierce Verdaukits bieten Enzyme und Reagenzien für die effiziente, reproduzierbare Verdauung und Guanidinierung zur Verbesserung der Peptidfragment-Ionisation.

Die Probenvorbereitung ist einer der variantenreichsten und zeitaufwendigsten Schritte bei der Analyse von Proteinen durch MS, und die Qualität und Reproduzierbarkeit der Probenextraktion und -vorbereitung wirken sich erheblich auf die Ergebnisse aus. Gelegentlich sind zusätzliche Schritte zur Verbesserung der Probenqualität erforderlich, einschließlich des Verdaus und der Rückgewinnung von Peptidfragmenten aus SDS-PAGE-Gelen oder der Peptid-Guanidination zur Verbesserung der Sequenzabdeckung. Jedes Kit wurde optimiert, um hochqualitative Peptidverdaue für eine zuverlässige Proteomikanalyse mit Massenspektrometrie zu produzieren.

Pierce In-Solution Tryptic Digestion and Guanidination Kit
Das Pierce In-Solution Trypsinverdau- und Guanisierungskit liefert ein optimiertes Verfahren und Reagenzien für ca. 90 Verdaue, die jeweils 0,025 bis 10 µg Protein enthalten.

• Vollständiger Verdau—Trypsin verdaut vollständig Protein von 0,025 bis 10 µg (∼90 Reaktionen).
• Spezifisch—Guanidinationsreaktion produziert wenig bis keine N-terminale Modifikation
• Praktisch—Das Kit enthält Reagenzien für Verdau, Reduktion, Alkylierung und Guanidination.
• Effizient—Protein kann an einem einzigen Tag verdaut und guanidiniert werden.

Trypsin spaltet insbesondere Peptid-Bindungen an der Carboxyseite von Arginin- und Lysin Rückständen. Die Signale der Arginin-haltigen Peptide sind aufgrund der basiseren Seitenkette im Allgemeinen stärker. Zur Verbesserung der Gesamtionisierung wandelt Guanidination Lysine in Homoarginine um und ist spezifisch für das Lysin-Amin, kann aber minimal am Amin des N-Terminus des Peptids auftreten. Diese Derivatisierung führt zu einer Erhöhung der Intensität der lysin-haltigen Peptide, und zu einer insgesamt verbesserten Sequenzabdeckung.

Pierce Kit für tryptischen In-Gel-Verdau
Das Pierce Kit für tryptischen In-Gel-Verdau bietet einen Komplettsatz an Reagenzien für die Durchführung von ungefähr 150 Verdaus auf kolloidalen Coomassie- oder mit fluoreszierendem Farbstoff gefärbten Proteinbändern. Das Kit enthält modifiziertes Schweinetrypsin, Entfärbungspuffer, Reduktionsreagenzien, Alkylierungsreagenzien und Verdaupuffer sowie detaillierte und einfache Anweisungen.

• Vollständig—enthält alle erforderlichen Reagenzien für Gel-Entfärbung, Reduktion, Alkylierung und tryptischen Verdau von Proteinen
• Robust—optimierte Verfahren und die Reagenzien erzeugen zuverlässige Verdaus und eine Datengenerierung unter einer Vielzahl von Bedingungen
• Spezifisch—enthält hochreines und modifiziertes Trypsin mit MS-Gütegrad ohne chymotryptische Aktivität und minimale autolytische Aktivität

Zwei wichtige Schritte zur Probenvorbereitung sind der vollständige Verdau von Proteinen in Peptide und anschließende Konzentration und Aufreinigung von Peptiden für die Massenspektrometrieanalyse. Das Pierce Kit für tryptischen In-Gel-Verdau führt den ersten dieser Schritte für Proteinproben aus Gelscheiben durch. Pierce C-18 Spin-Säulen und -Spitzen führen den zweiten Schritt durch, um die Probe aufzureinigen, damit sie MS-fähig ist.