Pierce™ Protein L Chromatography Cartridges

Die Thermo Scientific™ Pierce™ Chromatographie-Kassetten Protein G sind praktische, gebrauchsfertige, vorgepackte Geräte für die Isolierung und Aufreinigung von Immunglobulin der Klassen IgG, IgM, IgA, IgE und IgD über ihre Kappa-Leichtketten.

Pierce Protein G-Agarose besteht aus rekombinantem Protein G, das auf 6% hochwertiger, vernetzter und gekörnter Agarose (CL-6B) kovalent immobilisiert wurde. Diese spezielle Harz-Variante zeichnet sich durch die vielseitigste Kombination chromatographischer Eigenschaften aus und sorgt bei der Aufreinigung von Zielimmunoglobulinen für eine hohe Ausbeute und Reinheit. Dank ihrer physikalischen und chemischen Eigenschaften eignen sich die Agarosekörner für viele Systeme zur Affinitätsreinigung.

Merkmale von Pierce Protein L-Agarose:

• Protein L – immobilisiertes Protein L eignet sich hervorragend für die selektive Aufreinigung von Antikörpern aus Menschen und Mäusen mit Kappa-Leichtketten
• Agarose-Harz – der Träger ist ein vernetztes 6%iges Agarosegranulat (CL-6B), das beliebteste Harz für Verfahren zur Affinitätsreinigung von Proteinen
• Inert und stabil – erstklassiges Fertigungsverfahren immobilisiert Protein G durch ladungsfreie, Laugen-resistente kovalente Bindungen, die zu einer geringen unspezifischen Bindung führen und ohne Ausbeuteverlust vielfältig einsetzbar sind
• Standardkapazität – Pierce Protein L-Agarose enthält eine normale Menge an immobilisiertem Protein L und bietet eine Bindungskapazität von 5 bis 10 mg humanem IgG/ml Harz

Pierce Chromatographiekartuschen sind kompatibel mit größeren automatischen Flüssigchromatographiesystemen oder manueller Spritzenverarbeitung und lassen sich ohne zusätzliche Verbindungsstücke direkt an ÄKTA™- oder FPLC-Systeme anschließen. Das im Lieferumfang jedes Produkts enthaltene Zubehörpaket passt die Säulen für die Verwendung mit Luer-Lok-Spritzenanschlüssen oder 1/16”-Schläuchen an. Die Protein L-Kassetten ermöglichen schnelle, einfache und reproduzierbare chromatographische Trennungen und können für mehrere Anwendungen regeneriert werden.

Anwendungen:
• Reinigung monoklonaler und polyklonaler Antikörper, die sich schlecht an Protein A- oder Protein G-Agarose binden
• Aufreinigung monoklonaler Antikörper aus Kulturüberständen, die Rinderserum enthalten
• Protein L-Immunpräzipitation und Co-Immunpräzipitationsassays
• Aufreinigung von ScFv- und Fab-Fragmenten, die Kappa-Leichtketten enthalten

Protein L ist ein Immunoglobulin-bindendes Protein (36 kDa), das ursprünglich aus dem Bakterium Peptostreptococcus magnus stammt, nun aber rekombinant in E. coli hergestellt wird. Anders als Protein A und Protein G, die primär durch Fc-Regionen (also schwere Ketten) von Immunoglobulinen binden, bindet Protein L Igs durch Interaktionen mit leichten Ketten. Da kein Teil der schweren Kette an der Bindungsinteraktion beteiligt ist, bindet Protein L eine größere Anzahl an Ig-Klassen als Protein A oder G. Protein L bindet an Vertreter aller Klassen von Ig, einschließlich IgG, IgM, IgA, IgE und IgD. ScFv-Fragmente und Fab-Fragmente binden auch an Protein L.

Trotz dieser umfangreichen Bindungsfähigkeit bei Ig-Klassen ist Protein L kein universelles Immunoglobulin-Bindungsprotein. Die Bindung von Protein L an Immunoglobuline ist auf solche beschränkt, die Kappa-Leichtketten enthalten (also Kappa-Kette der VL-Domäne). Bei Menschen und Mäusen sind Kappa-Leichtketten vorherrschend. Die verbleibenden Immunoglobuline haben Lambda-Leichtketten. Zudem bindet Protein L nur bestimmte Untertypen von Kappa-Leichtketten. Beispielsweise bindet es menschliche Untertypen VkI, VkIII und VkIV, aber nicht den Untertyp VkII. Das Binden von Maus-Immunglobulinen ist auf jene mit VkI-Leichtketten beschränkt.

Durch diesen spezifischen Bedarf nach einer wirksamen Bindung ist die Hauptanwendung für immobilisiertes Protein L die Aufreinigung von monoklonalen Antikörpern aus Aszites oder Kulturgewebeüberstand, von denen bekannt ist, dass sie über eine Kappa-Leichtkette verfügen. Protein L ist sehr nützlich für die Aufreinigung von monoklonalen Antikörpern mit VLk aus Kulturüberstand, da es keine Immunoglobuline vom Rind bindet