NAb™ Protein L Spin Columns, 1 mL

Die Thermo Scientific NAb Protein L Spin-Säulen eignen sich für die schnelle Affinitätsreinigung von Antikörpern im kleinen Maßstab aus einer Vielzahl von Probentypen. Jede Säule mit 1 ml des immobilisierten Proteinharzes ermöglicht eine schnelle Aufreinigung von 5 bis 10 mg humanem IgG aus 0,5 bis 2 ml Serum oder einer anderen Probe.

Pierce Protein L-Agarose besteht aus rekombinantem Protein L, das auf 6% hochwertiger, vernetzter und gekörnter Agarose (CL-6B) kovalent immobilisiert wurde. Diese spezielle Harz-Variante zeichnet sich durch die vielseitigste Kombination chromatographischer Eigenschaften aus und sorgt bei der Aufreinigung von Zielimmunoglobulinen für eine hohe Ausbeute und Reinheit. Dank ihrer physikalischen und chemischen Eigenschaften eignen sich die Agarosekörner für viele Systeme zur Affinitätsreinigung.

Merkmale von Pierce Protein L-Agarose:

• Protein L – immobilisiertes Protein L eignet sich hervorragend für die selektive Aufreinigung von Antikörpern aus Menschen und Mäusen mit Kappa-Leichtketten
• Agarose-Harz – der Träger ist eine vernetzte 6%ige gekörnte Agarose (CL-6B), das beliebteste Harz für Verfahren zur Affinitätsreinigung von Proteinen
• Inert und stabil – erstklassiges Fertigungsverfahren immobilisiert Protein L durch ladungsfreie, Laugen-resistente kovalente Bindungen, die zu einer geringen unspezifischen Bindung führen und ohne Ausbeuteverlust vielfältig einsetzbar sind
• Standardkapazität – Pierce Protein L-Agarose enthält eine normale Menge an immobilisiertem Protein L und bietet ein Bindungsvermögen von 5 bis 10 mg humanem IgG/ml Harz

Anwendungen:
• Reinigung monoklonaler und polyklonaler Antikörper, die sich schlecht an Protein A- oder Protein G-Agarose binden
• Aufreinigung monoklonaler Antikörper aus Kulturüberständen, die Rinderserum enthalten
• Protein L-Immunpräzipitation und Co-Immunpräzipitationsassays
• Aufreinigung von ScFv- und Fab-Fragmenten, die Kappa-Leichtketten enthalten

Protein L ist ein Immunoglobulin-bindendes Protein (36 kDa), das ursprünglich aus dem Bakterium Peptostreptococcus magnus stammt, nun aber rekombinant in E. coli hergestellt wird. Anders als Protein A und Protein G, die primär durch Fc-Regionen (also schwere Ketten) von Immunoglobulinen binden, bindet Protein L Igs durch Interaktionen mit leichten Ketten. Da kein Teil der schweren Kette an der Bindungsinteraktion beteiligt ist, bindet Protein L eine größere Anzahl an Ig-Klassen als Protein A oder G. Protein L bindet an Vertreter aller Klassen von Ig, einschließlich IgG, IgM, IgA, IgE und IgD. ScFv-Fragmente und Fab-Fragmente binden auch an Protein L.

Trotz dieser umfangreichen Bindungsfähigkeit bei Ig-Klassen ist Protein L kein universelles Immunoglobulin-Bindungsprotein. Die Bindung von Protein L an Immunoglobuline ist auf solche beschränkt, die Kappa-Leichtketten enthalten (also Kappa-Kette der VL-Domäne). Bei Menschen und Mäusen sind Kappa-Leichtketten vorherrschend. Die verbleibenden Immunoglobuline haben Lambda-Leichtketten. Zudem bindet Protein L nur bestimmte Untertypen von Kappa-Leichtketten. Beispielsweise bindet es menschliche Untertypen VkI, VkIII und VkIV, aber nicht den Untertyp VkII. Das Binden von Maus-Immunglobulinen ist auf jene mit VkI-Leichtketten beschränkt.

Durch diesen spezifischen Bedarf nach einer wirksamen Bindung ist die Hauptanwendung für immobilisiertes Protein L die Aufreinigung von monoklonalen Antikörpern aus Aszites oder Kulturgewebeüberstand, von denen bekannt ist, dass sie über eine Kappa-Leichtkette verfügen. Protein L ist sehr nützlich für die Aufreinigung von monoklonalen Antikörpern mit VLk aus Kulturgewebeüberstand, da es keine Immunoglobuline vom Rind bindet, die im Ergänzungsstoff des Medienserums vorhanden sind. Protein L beeinträchtigt auch nicht den Antigenbindungsort des Antikörpers, sodass es selbst bei Verwendung von IgM für Immunpräzipitationsassays geeignet ist.

Pierce Protein L-Agarose wird mithilfe der Thermo Scientific AminoLink Kopplungs-Chemie hergestellt. Diese bietet im Vergleich zur herkömmlichen Ligandenimmobilisierung mehrere Vorteile. Bei der AminoLink-Immobilisierung entsteht über einfache Amidbindungen eine Konjugation zwischen Zuckermonomeren des Agarosegranulats und den nativen Lysin-Resten auf dem Protein A. Im Gegensatz zur herkömmlichen Immobilisierung mit Cyanbromid (CNBr) werden durch die AminoLink-Methode keine neuartigen chemischen Gruppen eingebracht, die zu unerwünschten unspezifischen Bindungen führen könnten, und es wird eine stabile und weitgehend irreversible Bindung erzeugt. Das Ergebnis ist ein Harz mit hoher Bindungskapazität, das auch nach mehreren Antikörperaufreinigungs-Durchläufen funktionales immobilisiertes Protein L enthält.

Pierce Protein L Agarose ist ein vielseitiges Affinitätsharz zur Aufreinigung von IgG-Isotypen von Säugetieren, die spezifische leichte Kappa-Ketten enthalten. Protein L ist insbesondere für die Isolierung von monoklonalen Antikörpern der Typen IgG VkI von Mäusen und IgG VkI, VkIII und VkIV von Menschen geeignet.

Eigenschaften der vernetzten 6%igen gekörnten Agarose (CL-6B):
• Unterstützung der pH-Stabilität: 2 bis 14 (kurzfristig); 3 bis 13 (langfristig)
• Durchschnittliche Partikelgröße: 45 bis 165 Mikrometer
• Ausschlussgrenze: 10.000 bis 4.000.000 Dalton
• Maximale volumetrische Durchflussrate: Ca. 1 ml/Minute (für Säulendurchmesser 1 cm)
• Maximale lineare Geschwindigkeit: 30 cm pro Stunde
•Maximaler Druck: weniger als 25 psi (1,5 bar), definiert als der maximale Druckabfall in einer Säule, dem das Harz standhalten kann (Hinweis: Der Druckmesser einer Flüssigchromatographie-Anlage zeigt möglicherweise den gesamten Systemdruck statt des Druckabfalls in der Säule an).

Weitere Produktdaten
• Verwendung von Antikörperbindungsproteinen für die Antikörperreinigung

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