Alexa Fluor™ 532 ein leuchtend gelber Fluoreszenzfarbstoff mit einer Anregung, die sich ideal für die frequenzverdoppelte Nd:YAG-Laserlinie eignet. Der Farbstoff Alexa Fluor™ 532, der für eine stabile Signalerzeugung in der Bildgebung und Durchflusszytometrie verwendet wird, ist wasserlöslich und pH-unempfindlich im Bereich von pH 4 bis 10. Zusätzlich zu reaktiven Farbstoffformulierungen bieten wir Alexa Fluor™ 532-Farbstoff an, der mit einer Vielzahl von Antikörpern, Peptiden, Proteinen, Tracern und Amplifikationssubstraten konjugiert und für die Zellmarkierung und den Nachweis optimiert ist (mehr erfahren).

Das Alexa Fluor™ 532-Maleimidderivat ist das beliebteste Hilfsmittel zur Konjugation dieses Farbstoffs mit einem Protein oder Antikörper. Die daraus resultierenden Alexa Fluor™ 532 Konjugate weisen eine hellere Fluoreszenz und eine größere Photostabilität auf als die Konjugate anderer spektral ähnlicher Fluorophore.

Ausführliche Informationen zu diesem AlexaFluor™ Maleimid:

Fluorophormarkierung: Alexa Fluor™ 532-Farbstoff
Reaktive Gruppe: Maleimid
Reaktivität: Thiolgruppen auf Proteinen und Liganden, Oligonukleotid-Thiophosphate
Ex/Em des Konjugats: 528/552 nm
Extinktionskoeffizient: 78.000 cm-1M-1
Molekulargewicht: 812,88

Typische Konjugationsreaktion
Das Protein sollte bei einer Konzentration von 50 bis -100 µM in einem geeigneten Puffer (10 bis 100 mM Phosphat, Tris oder HEPES) bei pH-Wert 7,0 bis 7,5 aufgelöst werden. In diesem pH-Bereich sind die Thiolgruppen des Proteins so nukleophil, dass sie trotz zahlreich vorhandener Proteinamingruppen, die protoniert und relativ unreaktiv sind, fast ausschließlich mit dem Reagenz reagieren. Wir empfehlen, an diesem Punkt jegliche Disulfidbrücken mit einem Reduktionsmittel 10-fachen molaren Überschusses, wie DTT oder TCEP, zu reduzieren. Überschüssiges DTT muss durch Dialyse entfernt werden. Nachfolgende Thiol-Modifikationen sollten unter sauerstofffreien Bedingungen durchgeführt werden, um eine Neubildung der Disulfid-Verbindungen zu verhindern. Diese Vorsichtsmaßnahmen sind bei der Verwendung von TCEP vor der Maleimid-Konjugation nicht erforderlich.

Das Alexa Fluor™-Maleimid wird in der Regel unmittelbar vor der Verwendung in hochwertigem, wasserfreiem Dimethylsulfoxid (DMSO) mit einer Konzentration von 1 bis 10 mM aufgelöst, und Stammlösungen sollten möglichst vor Licht geschützt werden. Im Allgemeinen wird diese Stammlösung der Proteinlösung tropfenweise unter Rühren hinzugefügt, um rund 10 bis 20 Mol Reagenz pro Mol Protein zu erzielen. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur für 2 Stunden oder bei 4 °C über Nacht und vor Licht geschützt erfolgen. Alle unreagierten Thiol-reaktiven Reagenzien können durch Hinzufügen von überschüssigem Glutathion, Mercaptoethanol oder von anderem löslichen niedermolekularen Thiol verbraucht werden.

Konjugataufreinigung
Markierte Antikörper werden normalerweise vom freien Alexa Fluor™-Farbstoff in einer Gel-Filtrationssäule, z. B. Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 o.ä., getrennt. Wählen Sie bei sehr großen bzw. kleinen Proteinen ein Gelfiltrationsmedium mit geeigneter molekularer Ausschlussgrenze (MWCO), oder entscheiden Sie sich für eine Reinigung per Dialyse. Wir bieten verschiedene Aufreinigungskits, die für unterschiedliche Mengen von Antikörperkonjugat optimiert sind:
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 0,5 – 1 mg (A33086)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 20 – 50 µg (A33087)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 50 – 100 µg (A33088)

Weitere Informationen zur Protein- und Antikörpermarkierung
Wir bieten eine breite Auswahl an Molecular Probes™ Antikörper- und Proteinmarkierungskits, passend zu Ihrem Ausgangsmaterial und Ihrer Experimentanordnung. Weitere Optionen finden Sie unter Antikörper-Markierungskits, oder nutzen Sie unser Auswahlwerkzeug für die Markierungschemie. Weitere Informationen zu unseren Markierungskits finden Sie unter Protein- und Nukleinsäuremarkierungskits—Kapitel 1.2 im Molecular Probes™ Handbuch.

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’’’Wenn Sie in unserem Online-Katalog das Gesuchte nicht finden, erstellen wir gern für Sie ein Antikörper- oder Proteinkonjugat nach Ihren individuellen Vorgaben. Unser individualisierter Konjugationsservice arbeitet effizient und absolut vertraulich, und wir verbürgen uns für die Qualität unserer Arbeit. Wir sind ISO 9001:2000 zertifiziert.