Blasticidin S HCl (10 mg/ml)

Blasticidin S ist ein Peptid-Nukleosid-Antibiotikum, das aus Streptomyces griseochromogenes isoliert wird. Es ist ein potenter Inhibitor der Proteinsynthese in Bakterien und Eukaryoten, während es auch gegen Pilze, Nematoden und Tumorzellen aktiv ist. Blasticidin S wirkt durch Blockieren der Hydrolyse von Peptidyll-tRNA, die durch Trennungsfaktoren induziert wird, und hemmt die Bildung von Peptidbindungen. Es wird als Selektionsmittel sowohl in Säugetier- als auch in Bakterienzellen eingesetzt. Der empfohlene Konzentrationsbereich liegt je nach Zelllinie zwischen 1 und 30 μg/ml und zwischen 25 und 100 μg/ml für die bakterielle Selektion. Der Zelltod tritt schnell ein, und Blasticidin-resistente stabile Säugetierzelllinien können in unter einer Woche erzeugt werden.

Die Resistenz gegenüber Blasticidin S wird durch BSR und BSD verleihen; isoliert von Bacillus cereus K55-S bzw. Aspergillus terreus. Das BSR-Resistenzgen kodiert Blasticidin S-Deaminase, das die Umwandlung von Blasticidin S in Deaminohydroxyblasticidin S katalysiert. Deaminohydroxyblasticidin S ist ein biologisch inaktives Derivat von Blasticidin S und interagiert nicht mit prokaryotischen oder eukaryotischen Ribosomen oder hemmt diese. Das BSD-Resistenzgen kodiert auch eine Blasticidin S-Deaminase, was eine ähnliche Reaktion auf die BSR-Deaminase katalysiert. Für die Bakterienselektion muss der Salzgehalt des LB-Mediums niedrig bleiben (unter 90 mM), und der pH-Wert sollte 7,0 nicht überschreiten, um die Aktivität von Blasticidin S beizubehalten. Eine Abtötungskurve wird empfohlen, um die minimale effektive Blasticidin S-Konzentration zur Abtötung nicht resistenter Zellen zu bestimmen.

Anwendungen
Detaillierte Protokolle zur Blasticidin-Auswahl in Säugetier-, E. coli- und Hefezellen anzeigen.