GeneArt™ Type IIs Assembly Kit, Bsa I

Das GeneArt® Typ IIs Kit für Assemblierung, Bsa I, ermöglicht nahtloses Klonieren und Zusammenfügen von bis zu 8 DNA-Fragmenten durch gleichzeitige Spaltung und Ligation in einer einzigen Reaktion. Das Kit verwendet eine dem Golden Gate Cloning ähnliche Technologie mit dem Typ-IIs-Restriktionsenzym Bsa I. Es wird verwendet, um mehrere Fragmente in einer vordefinierten Reihenfolge zu einem beliebigen kompatiblen Vektor zusammenzusetzen. Da die IIs-Assemblierung nicht auf homologer Rekombination basiert, besteht ein minimales Risiko von Neuanordnungen, sodass eine minimale Verifizierung der Sequenz Ihres endgültigen Konstrukts erforderlich ist.

Das Kit wird in drei Versionen angeboten, jeweils mit einem anderen Typ-IIs-Restriktionsenzym (Aar I, Bsa I oder Bbs I). Alle Versionen umfassen ein All-in-One-Enzymgemisch, einen Klonierungsvektor und Klonierungskontrollen. Unser GeneArt® Entwicklungstool für Primer und Konstrukte dient zur Bestimmung des passenden GeneArt® Assembly Kits für Ihre Fragmente. Es bietet eine anwenderfreundliche Oberfläche für die Entwicklung, Erstellung und Bestellung von Primern, falls diese benötigt werden.

• Stellen Sie mehrere DNA-Fragmente in beliebiger Reihenfolge in einem kompatiblen Vektor ohne Narben zusammen
• Vermeiden Sie homologe Rekombination und Neuanordnungen beim Klonen homologer oder repetitiver Sequenzen
• Zur Zusammensetzung von TALs, Genvarianten und repetitiven Sequenzen
• Erstellen Sie Ihre eigenen Klonierungs- und Expressionsvektoren mit benutzerdefinierten Vektorelementen
• Minimieren Sie die Sequenzbestätigung des endgültigen Konstrukts
• Wählen Sie aus drei Typ-IIs-Enzymen

Typ-IIs-Klonierung
GeneArt® Typ-IIs-Klonierung ist ein einfacher, zweistufiger Prozess, bestehend aus In-vitro-Assemblierung gefolgt von Transformation in kompetenten E. coli. Der Typ-IIs-Restriktionsendonuklease Bsa I erkennt eine asymmetrische DNA-Sequenz und spaltet das DNA-Molekül in einem definierten Abstand von der Bsa-I-Erkennungsstelle. Optional können die Enden Ihres DNA-Fragments von der Bsa-I-Restriktionsstelle flankiert werden. Auf diese Weise wird bei der Verdauung der Fragmente die Erkennungsstelle entfernt und komplementäre Überhänge erzeugt. Diese können anschließend nahtlos ligiert werden, um so Verbindungen ohne die ursprüngliche Stelle zu schaffen. Das Kit enthält einen Zielvektor namens pTyp-IIs, der für diesen Ansatz optimiert ist.

Effizienz, Flexibilität und Präzision bei der Klonierung
Beim GeneArt® Type IIs Kit für Assemblierung sind die wichtigsten Faktoren für die Klonierungseffizienz die Größe der DNA-Elemente, die Gesamtgröße des endgültigen Moleküls (bis zu 13 kb) und die Qualität und Spezifität des Fragments.

Typische Klonierungseffizienzen für unterschiedliche Anzahlen von Fragmenten, geklont in pTyp IIs, sind:

• >95 % für 5 Fragmente von je 1 kb
• >60 % für 8 Fragmente von je 1 kb
• >85 % für 2 identische Fragmente von je 1 kb

Support bei der Erstellung von in silico-Klonierungen
Ein wichtiger Schritt bei der GeneArt® Typ-IIs-Klonierung ist das richtige Design der Fragmente und Oligos mit entsprechenden Erkennungsstellen und Abständen, die eine erfolgreiche Zusammenstellung Ihres Klons sicherstellen. Zur Vereinfachung und Beschleunigung des Designprozesses bieten wir das GeneArt® Design-Tool für Primer und Konstrukte als Hilfsmittel bei der Planung Ihres In-silico-Experiments. Das Tool empfiehlt das passende GeneArt® Kit für Ihre Assemblierung, prüft die Kompatibilität des experimentellen Designs mit den Produktspezifikationen, entwirft bei Bedarf DNA-Oligos, stellt den Vektor grafisch dar und bietet eine herunterladbare kommentierte Sequenz im GenBank-Format an, die mit der VectorNTI® Software kompatibel ist.

Weitere empfohlene Produkte:
• Zero Blunt® PCR-Kit für TOPO® PCR-Klonierung, ohne kompetente Zellen (Kat. Nr. 450245
•Zero Blunt® Kit für TOPO® PCR-Klonierung, mit One Shot® TOP10 chemisch kompetenten E. coli (Kat. Nr. K280020)
• OneShot® MAX Efficiency™ DH10B™ T1 phagenbeständige Zellen (Kat. -Nr. 12331-013)