Epi5™ Episomal iPSC Reprogramming Kit
Invitrogen™

Epi5™ Episomal iPSC Reprogramming Kit

Das Epi5™ Episomal iPSC Umprogrammierungskit bietet eine anwenderfreundliche, hocheffiziente Reihe von 5 episomalen Vektoren, die von Dr. Okita im LaborWeitere Informationen
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KatalognummerMenge
A159601 Kit
Katalognummer A15960
Preis (EUR)
1.446,00
Each
Menge:
1 Kit
Preis (EUR)
1.446,00
Each
Das Epi5™ Episomal iPSC Umprogrammierungskit bietet eine anwenderfreundliche, hocheffiziente Reihe von 5 episomalen Vektoren, die von Dr. Okita im Labor von Professor Yamanaka am Zentrum für iPS-Zellforschung und -anwendung (CiRA) der Universität Kyoto entwickelt wurden. Dieses System produziert transgen- und virenfreie, humaninduzierte pluripotente Stammzellen (iPSCs) mit Wirkungsgraden im Bereich von 0,04 bis 0,3 %, je nachdem, welcher Zelltyp neu programmiert wird.

Das Epi™ Episomal iPSC Umprogrammierungskit bietet folgende Funktionen:

•Leicht anwendbar und hocheffizient: keine kleinen Moleküle erforderlich, und die zusätzliche p53-Suppression ermöglicht eine verbesserte iPSC-Generierung (1)
• Verwendbar für alle Stadien Ihrer Forschung an iPSC: Transgen- und Virus-freie Reprogrammierung ermöglicht die Nutzung in der Grundlagen- bis hin zur präklinischen Forschung
• Flexibilität bei Mediensystemen: verwendbar in Mediensystemen mit und ohne Feeder

Erzeugung von Transgen- und Virus-freien iPSCs
Episomale Vektoren sind ein vielfach beschriebenes System für die Erzeugung von Transgen- und Virus-freien iPSCs und damit einer Quelle von iPSCs für alle Stadien Ihrer Forschung an pluripotenten Stammzellen. Andere Reprogrammierungsmethoden wie das Lentivirus enthalten Transgene, die sich in das Wirtsgenom integrieren können und dadurch möglicherweise Störungen des Genoms oder unvorhersehbare Ergebnisse verursachen könnten.

Als oriP/EBNA1-Vektoren enthalten diese episomalen Vektoren 5 Umprogrammierungsfaktoren (Oct4, Sox2, Lin28, Klf4 und L-Myc) und replizieren extrachromosomal nur einmal pro Zellzyklus. Bei dieser Replikationsrate gehen die Episome mit einer Rate von etwa 5 % pro Zellgeneration verloren. Dieses System zeigt eine verbesserte iPSC-Generierung durch p53-Suppression, und die Aufnahme von L-Myc hat sich bei der Erzeugung menschlicher iPSC als potenter und spezifischer als c-Myc erwiesen (1).

Anwenderfreundlich es System
Dieses Kit mit 2 Fläschchen bietet das optimale System zur Umprogrammierung des episomalen Vektors und macht die Verwendung kleiner Moleküle im Umprogrammierungsmedium überflüssig. Die episomalen Vektoren werden durch Elektroporation in die Zelle eingeführt. Zur Elektroporation empfehlen wir die Verwendung des Neon™ Transfektionssystems, wodurch das Volumen und damit die Anzahl der Zellen, die für die Neuprogrammierung benötigt werden, flexibler gewählt werden kann.

Flexibilität bei der Auswahl von Mediensystemen
Das Epi5™ Episomal iPSC Umprogrammierungskit kann mit einer Vielzahl von Zelltypen und Mediensystemen verwendet werden. Protokolle für Fibroblasten und CD34+ Blutkörperchen sind als Umprogrammierung mit oder ohne Nährboden erhältlich.

1. Okita K, Matsumara Y, Sato Y, et al. Eine effizientere Methode zur Generierung integrationsfreier menschlicher iPS-Zellen. Nature Methods 8, 409-412, 2011.
Nur für Forschungszwecke. Darf nicht für diagnostische Verfahren eingesetzt werden.
Specifications
KlonierungsmethodeKeine
LiefertypTransfektion
Zur Verwendung mit (Anwendung)Stammzellen-Engineering und -Reprogrammierung
Zur Verwendung mit (Geräte)Elektroporator, Neon Transfektionssystem
Hauptbedienfelderel
ProduktlinieEpi5
ProdukttypEpisomales iPSC Umprogrammierungskit
PromoterCAG
ProteinmarkierungKeine
Menge1 Kit
ReplikationsursprungpUC-Ursprung
Reporter-GenKeine
Selektionsmittel (eukaryotisch)Keine
VektorEBNA-OriP
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
2 Röhrchen. Bei -5 bis -20 °C lagern.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

Can I use pen/strep or other antibiotics for episomal reprogramming of cells?

The use of antibiotics is not recommended during episomal reprogramming, especially Fungizone antimycotic. If antibiotics must be used during the reprogramming process, pen/strep could be used. For established iPSCs (after reprogramming is complete), either antibiotic/antimycotic or pen/strep should be fine.

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Can I reprogram mouse cells with the Epi5 Episomal iPSC Reprograming Kit (Cat. No. A15960)?

No. The Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit (Cat. No. A15960) was designed to reprogram human cells, not mouse cells. We currently only have data with this kit on reprogramming human cells, which aligns with the use of EBNA/oriP episomal vectors mainly in primate cells. Although rodent cells lack the oriP replicon and are not permissive, some studies replaced or modified oriP with other sequences to mediate replication and some literature reported the use of unmodified EBNA/oriP in certain hamster and mouse lines.

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When generating iPSCs using the Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit (Cat. No. A15960), how confluent should my cells be on the day of transfection?

When generating iPSCs using the Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit (Cat. No. A15960) cells should be approximately 75-90% confluent on the day of transfection (Day 0). Since over-confluency results in decreased transfection efficiency, we recommend replating overly confluent cells to achieve 75-90% confluency on the day of transfection.

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How many reprogramming experiments can I perform with the Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit (Cat. No. A15960)?

The Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit (Cat. No. A15960) provides enough material to process 20 reprogramming experiments (each reprogramming experiment requires 1 × 105 cells and 1 µL each of the Epi5 Reprogramming Vectors and the Epi5 p53 & EBNA Vectors). Each vial of vectors in the kit contains 20 µL, and you will use 1 µL (from each vial) per experiment. Before use, briefly centrifuge the thawed vectors to collect them at the bottom of the tube.

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Which kits do you offer for stem cell reprogramming?

We offer the Invitrogen CytoTune-iPS 2.0 Sendai Reprogramming Kit (Cat. Nos. A16517, A16518) which is a non-integrating system that uses Sendai virus vectors to reprogram somatic cells into induced pluripotent stem cells (iPSCs). The Invitrogen CytoTune-iPS 2.0 Sendai Reprogramming Kit contains three Invitrogen CytoTune 2.0 reprogramming vectors that are used for delivering and expressing key genetic factors necessary for reprogramming somatic cells into iPSCs. Only one application of the vectors is required for successful reprogramming.

Additionally, we offer the Episomal iPSC Reprogramming Vectors (Cat. No A14703) or Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit (Cat. No A15960). This is a non-integrating system that reprograms somatic cells into induced pluripotent stem cells (iPSCs). These two products contain a mixture of six or five vectors designed to provide the optimal system for generating transgene-free and virus-free iPSCs in a feeder-free environment. Originally developed by Junying Yu and James Thomson (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19325077) and further optimized by Cellular Dynamics International, these Episomal iPSC Reprogramming Vectors have proven successful in reprogramming a number of different somatic cell types.

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Zitierungen und Referenzen (2)

Zitierungen und Referenzen
Abstract
An optogenetic approach for assessing formation of neuronal connections in a co-culture system.
Authors:Su CT, Yoon SI, Marcy G, Chin EW, Augustine GJ, Goh EL,
Journal:
PubMed ID:25742527
'Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are reprogrammed from human fibroblasts using episomal vectors. Colonies of iPSCs can be observed 30 days after initiation of fibroblast reprogramming. Pluripotent colonies are manually picked and grown in neural ... More
Generation of human iPSCs from cells of fibroblastic and epithelial origin by means of the oriP/EBNA-1 episomal reprogramming system.
Authors:Drozd AM, Walczak MP, Piaskowski S, Stoczynska-Fidelus E, Rieske P, Grzela DP,
Journal:
PubMed ID:26088261
The prospect of therapeutic applications of the induced pluripotent stem cells (iPSCs) is based on their ability to generate virtually any cell type present in human body. Generation of iPSCs from somatic cells has opened up new possibilities to investigate stem cell biology, to better understand pathophysiology of human diseases, ... More