GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector with OFP Reporter Kit
GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector with OFP Reporter Kit
Invitrogen™

GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector with OFP Reporter Kit

Das GeneArt™ CRISPR-Nuklease-Vektor mit OFP Reporter Kit ist ein Vektorsystem für die Exprimierung der funktionalen Komponenten für das CRISPR/Cas9 Genome-EditingWeitere Informationen
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KatalognummerMenge
A2117410 reactions
Katalognummer A21174
Preis (EUR)
774,00
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Menge:
10 reactions
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Das GeneArt™ CRISPR-Nuklease-Vektor mit OFP Reporter Kit ist ein Vektorsystem für die Exprimierung der funktionalen Komponenten für das CRISPR/Cas9 Genome-Editing in Säugetierzellen mit einem orange fluoreszierenden Reporterprotein (OFP). Der OFP-Reporter ermöglicht die Fluoreszenz-gestützte Verfolgung der Transfektionseffizienz sowie die FACS-basierte Sortierung/Anreicherung von cas9 und CRISPR exprimierenden Zellen. Die linearisierten GeneArt™ CRISPR-Nuklease-Vektoren bieten eine schnelle und effiziente Möglichkeit zur Klonierung doppelsträngiger Oligonukleotide, die crRNA codieren, die das gewünschte Ziel in eine Expressionskassette, die die sequenzspezifische Ausrichtung der Cas9-Nuklease ermöglicht, einbringt. Eine Ausführung mit kompetenten Zellen ist ebenfalls erhältlich (Kat.-Nr. Nr. A21178).

Das GeneArt™ CRISPR-Nuklease-Vektorsystem bietet:
• Anwenderfreundliches Genomtechniksystem
• Erschwingliche, gebrauchsfertige Klonierungsvektoren
• Anreicherung schwer zu transfizierender oder schwer zu modifizierender Zelllinien

All-in-One Vektor-System für CRISPR-basierte Genombearbeitung
Das GeneArt™ CRISPR Nukleasevektor-Kit bietet ein einfaches, gebrauchsfertiges All-in-One-Expressionsvektorsystem, bestehend aus einer Cas9-Nuklease-Expressionskassette und einer Guide RNA (gRNA)-Klonierungskassette für das schnelle und effiziente Klonen von DNA, die zielspezifische CRISPR-RNA (crRNA) kodiert. Dieses System ermöglicht Ihnen das Editieren und Konstruieren eines Genom-Lokus nach Wahl aus einem einzigen Plasmid und auf sequenzspezifische Art und Weise. Nach der Erkennung relevanter Ziele mit schnellen und einfach zu verwendenden GeneArt™ CRISPR-Vektoren können die biologisch relevanten Mutationen mit GeneArt™ Präzisions-TALs mit hoher Spezifität und geringen Off-Target-Effekten präzise erstellt werden.

Benötigen Sie Unterstützung beim CRISPR gRNA-Design?
Mit unserem neuen CRISPR Search & Design-Tool können Sie unsere Datenbank mit mehr als 600.000 vorgefertigten CRISPR gRNAs in Genen von Mensch und Maus durchsuchen oder Ihre Sequenz von Interesse für de novo-gRNA-Designs mit unseren proprietären Algorithmen analysieren. CRISPR-Sequenzen sind für Gen-Knockout optimiert und auf die ersten drei transkribierten Exons für jedes Gen ausgerichtet. Suchergebnisse enthalten die besten 6 CRISPR-Sequenzen mit PAM-Stellen, Exon-Kartierungen mit gRNA-Bindungsstellen und potenzielle Off-target Bindungsstellen für jede CRISPR-Sequenz. Das Tool erstellt ein korrektes gRNA-Format für Ihr bevorzugtes CRISPR/Cas9 Produkt, einschließlich der Oligos für Ihren GeneArt™ CRISPR-Nuklease-Vektor. Starten Sie Ihr Design noch heute >
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Specifications
KlonierungsmethodeRestriktionsenzym/MCS
FormatKit
Anzahl Reaktionen10 Reaktionen
Überhang3‘ Überhänge
ProduktlinieGeneArt
ProdukttypCrispr-Nukleasevektor mit ofP-Reporterkit
PromoterU6, CMV
ProteinmarkierungOFP-Fusion
Menge10 reactions
Reporter-GenOFP
AusgangsmaterialOligos (DNA)
Ausreichend für10 Reaktionen
VerfahrenCRISPR-Cas9
NachweisverfahrenPrimer-Sonde
Zur Verwendung mit (Anwendung)Genexpression, Cloning
FormFlüssig
ReaktionsgeschwindigkeitSchnell
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
Enthält:
• CRISPR OFP Nuklease-Vektor, linearisiert
• 10X Oligonukleotid-Annealing-Puffer
• DNase/RNase-freies Wasser
• 5X Ligationspuffer
• T4 DNA-Ligase
• U6 Vorwärtssequenzierungsprimer
• Kontrolle, doppelsträngiges Oligonukleotid

Im Gefriergerät lagern (-5 bis -30 °C).

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

What is CRISPR-STOP?

CRISPR-STOP is a method of inserting STOP codon sequences to generate knockouts.

Please refer to the following article: CRISPR-STOP: gene silencing through base-editing-induced nonsense mutations.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Genome Editing Support Center.

What transfection methods do you recommend when working with your CRISPR products?

For transfecting of the Cas9 protein, we would recommend using the Neon transfection system or Lipofectamine CRISPRMAX Cas9 Transfection Reagent. For transfection of mRNA, we would recommend using Lipofectamine MessengerMAX Transfection Reagent. For transfection of CRISPR vectors, we would recommend using Lipofectamine 3000 Transfection reagent.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Transfection Support Center.

Do you have CRISPR products optimized for plants?

Our CRISPR products are optimized for mammalian systems, and have not been optimized for plant systems. However, we know researchers are doing that kind of work. While we have not tested our CRISPR products for plants, our new protein format would be ideal since it does not need to be translated and transcribed in the cell, so no plant-specific promoters required.

What are the benefits of using TAL/TALEN-based genome editing compared to your CRISPR system?

Invitrogen GeneArt Precision TALs, in addition to gene deletion, down-regulation and integration, can also be used for gene activation. Additionally, the system is based on a protein-DNA system, in contrast to CRISPR, which is based on a RNA-DNA system. TALs can be used to target any gene in any cell, including mammalian, bacterial, yeast, plants, insect, stem cells and zebrafish. Lastly, off-target effects are low when using the TAL system. Please refer to the following paper (http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S016816561500200X) where the authors compared TALs and CRISPR technology.

I am using the Invitrogen GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit and am getting very few ampicillin-resistant colonies on my selection plate. What could be the cause of this? Do you have any suggestions?

Here are possible reasons and solutions:

- Single-stranded (ss) oligonucleotides designed incorrectly; Make sure that each ss oligonucleotide contains the 5 nucleotides on the 3′ end required for cloning into the Invitrogen GeneArt CRISPR Nuclease Vector: ie., Top strand includes GTTTT on the 3′ end; Bottom strand includes CGGTG on the 3′ end.

- Double-stranded (ds) oligonucleotides were degraded; Store the 5 nM ds oligonucleotide stock in 1X Oligonucleotide Annealing Buffer. Avoid repeated freeze/thaw cycles; aliquot the 5 nM ds oligonucleotide stock and store at -20°C.

- Oligonucleotide annealing reaction inefficient; Ensure that the annealing reaction was performed as directed. If ambient temperature is >25°C, incubate the annealing reaction in a 25°C incubator.

Zitierungen und Referenzen (1)

Zitierungen und Referenzen
Abstract
Rapid and highly efficient mammalian cell engineering via Cas9 protein transfection.
Authors:Liang X, Potter J, Kumar S, Zou Y, Quintanilla R, Sridharan M, Carte J, Chen W, Roark N, Ranganathan S, Ravinder N, Chesnut JD,
Journal:
PubMed ID:26003884
'CRISPR-Cas9 systems provide a platform for high efficiency genome editing that are enabling innovative applications of mammalian cell engineering. However, the delivery of Cas9 and synthesis of guide RNA (gRNA) remain as steps that can limit overall efficiency and ease of use. Here we describe methods for rapid synthesis of ... More