Das APO-BrdU-TUNEL-Assay-Kit liefert die Materialien, die zur Kennzeichnung von DNA-Strangbrüchen für den Nachweis apoptotischer Zellen erforderlich sind, sowie fixierte Proben positiver und negativer Kontrollzellen zur Beurteilung der Assay-Leistung. Vollständige Protokolle für Durchflusszytometrie-Anwendungen sind ebenfalls im Lieferumfang enthalten. Das Kit kann aber auch für die Verwendung mit Fluoreszenzmikroskopie angepasst werden. Der letztliche Nachweis der BrdU-Integration an DNA-Bruchstellen wird durch einen mit Alexa Fluor 488 Farbstoff markierten Anti-BrdU-Antikörper erreicht. Das Kit enthält außerdem Propidiumiodid zur Bestimmung des Gesamt-DNA-Gehalts in der Zelle.
Das APO-BrdU-TUNEL-Assay-Kit erkennt die DNA-Fragmentierung apoptotischer Zellen, indem es sich die Tatsache zunutze macht, dass die DNA-Brüche eine große Anzahl von 3´-Hydroxyl-Enden freisetzen. Diese Hydroxylgruppen können anschließend als Ausgangspunkt für die terminale Desoxyribonukleotidyltransferase (TdT) dienen, die Template-unabhängig Desoxyribonukleotide hinzufügt. Die Zugabe von Desoxythymidin-analogem 5-Bromo-2´-Desoxyuridin 5´-Triphosphat (BrdUTP) zur TdT-Reaktion dient der Markierung der Bruchstellen. Nach der Aufnahme in die DNA kann BrdU durch einen Anti-BrdU-Antikörper in einem standardmäßigen immunhistochemischen Verfahren nachgewiesen werden. Diese Methode zur Markierung von DNA-Brüchen wird als terminale Desoxynukleotidyltransferase-dUTP Nick End Labeling“ oder TUNEL bezeichnet.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.