High Select™ Reagenzien für Phosphopeptid-Anreicherungs-Kits&

Die Massenspektrometrie (MS) ist ein Schlüsselwerkzeug für die Identifizierung von Stellen mit Proteinphosphorylation und die Quantifizierung von Veränderungen der Phosphorylation. Die MS-Analyse der Proteinphosphorylation ist jedoch aufgrund der niedrigen Stöchiometrie, der hohen Hydrophilität, der schlechten Ionisierung und der unvollständigen Fragmentierung von Phosphopeptiden eine Herausforderung. Durch die geringe relative Fülle von Phosphorylationsmodifikationen in komplexen Proteinproben ist eine Anreicherung für eine erfolgreiche MS-Analyse von Phosphopeptiden unerlässlich. Die High-Select Fe-NTA und TiO₂ Phosphopeptid-Anreicherungskits ergänzen unsere Lyse-, Reduktions-, Alkylierungs- und Verdaureagenzien zusammen mit unseren C18-, Graphit-Spin- und High-pH-Umkehrphasen-Peptid-Fraktionierungssäulen, wodurch ein vollständiger Arbeitsablauf für die Phosphopeptid-Anreicherung zur Verfügung steht.

• Praktisch—vorformulierte Puffer für einfache Verwendung in Spin-Säulen (Fe-NTA und TiO₂) oder magnetische Formate (Fe-NTA) für die parallele Verarbeitung mehrerer Proben
• Hohe Spezifität—ermöglicht die Rückgewinnung von Phosphopeptiden mit > 90 % Selektivität
• Hervorragende Rückgewinnung—reichert insgesamt eine größere Menge und mehr einzigartige Phosphopeptide als andere handelsübliche Harze an
• Hohe Rückgewinnung—Rückgewinnung von Peptiden mit einzelnen und mehreren Phosphorylierungsstellen
• Skalierbar—kompatibel mit Automatisierung, einschließlich der Verwendung von KingFisher Magnetpartikelprozessoren

High-Select Fe-NTA Phosphopeptid-Anreicherungskitreichert Phosphopeptide aus komplexen Proben mit Eisen-Chelat-Harz in Spin-Säulen an. Jede Säule kann Phosphopeptide von 0,5 bis 5 mg Gesamtproteinverdau als Ausgangsprobe anreichern. Zusammen mit vorformulierten Puffern reichert das verbesserte und vereinfachte Verfahren in weniger als 45 Minuten bis zu 150 μg Phosphopeptide mit einer Selektivität von mehr als 90 % an.

Das High-Select TiO2 Phosphopeptid Anreicherungskit enthält 24 Titandioxid (TiO2)-Spin-Spitzen mit optimierten Puffern und erleichtert so die Vorbereitung von angereicherten Phosphopeptiden. Jede Säule kann Phosphopeptide von 0,5 bis 3 mg Gesamtproteinverdau als Ausgangsprobe anreichern. Die optimierten Puffer und das vereinfachte Verfahren machen Pyrrolidin im Elutionspuffer und die anschließende Reinigung mit Graphit-Spin-Säulen überflüssig. Die Verwendung dieses Kits führt zu einer Anreicherung von bis zu 150 μg Phosphopeptiden mit einer Selektivität von mehr als 90 %. TiO2 reichert eine einzigartige Gruppe von Phosphopeptiden an, die das High-Select Fe-NTA IMAC Phosphopeptide Anreicherungskit ergänzt.

Das High-Select Fe-NTA Magnetic Phosphopeptid Anreicherungskit reichert Phosphopeptide aus komplexen Proben mit Eisen-Chelat-Magnet-Agarose-Beads an. Jede Reaktion reicht aus, um in weniger als 45 Minuten 250–1000 μg Phosphopeptide aus 0,5–5 mg Gesamtproteinverdau als Ausgangsprobe anzureichern. Darüber hinaus kann das Kit auch zur Anreicherung von chemisch modifizierten Peptiden mit funktionellen Gruppen verwendet werden, die für immobilisierte Metallaffinitätschromatographie-Harze entwickelt wurden.

High Select Fe-NTA Magnetic Agarose wurde speziell für die Anreicherung von Phosphopeptiden und chemisch modifizierten Peptiden für die MS-Analyse entwickelt. Unsere nicht aggregierenden, mit Magnetit (Fe₃O₄) versehenen superparamagnetischen Beads bieten eine außergewöhnliche Gleichförmigkeit für hohe Leistung in manuellen und automatisierten Aufreinigungsanwendungen. Die Fe-NTA Magnetic Agarose ist separat erhältlich, was die experimentelle Konzeption flexibel macht.

Zur hochauflösenden Analyse der angereicherten Phosphopeptide wird als LC-Säule für die Nanospray Flex-Quelle die Acclaim PepMap 100 C18 LC-Säule empfohlen (Bestell- (Best.-Nr. 164942 oder 164939). Für die Quelle EASY-Spray wird die LC-Säule EASY-Spray C18 empfohlen (Best.- Nr. ES902 oder ES903). Die eigenständigen High Select Fe-NTA Magnetic Agarose-Beads bieten Flexibilität für Skalierung und Durchsatz und können sowohl in manuellen als auch automatisierten Plattformen, einschließlich KingFisher 96 und KingFisher Flex Magnetpartikelprozessoren, verwendet werden.