Thermo Scientific Pierce magnetische Anti-DYKDDDDK-Agarose bietet eine schnelle und bequeme Methode zur Aufreinigung und Immunpräzipitation (IP) von DYKDDDDK-markierten Proteinen von In-vitro-Proteinexpressionssystemen, Bakterien, Hefen und Säugetierzellen. Die Aminosäuresequenz DYKDDDDK, allgemein als „FLAG“ bekannt, wird von einem hochaffinen, monoklonalen Rattenantikörper (Klon L5) erkannt, der kovalent an einen Magnetit-eingebetteten Agarose-Kernpartikel gebunden ist.

Zur Proteinaufreinigung wird die magnetische Agarose zu einer Probe hinzugefügt, die DYKDDDDK-markierte Proteine mit dem Tag entweder am N- oder C-Terminus enthält. Erfasste Proteine werden dann magnetisch vom Überstand getrennt und unspezifisch gebundene Proteine können durch Waschen entfernt werden, bevor gebundene, DYKDDDDK-markierte Proteine mit einem Elutionspuffer dissoziiert werden. Die magnetische Agarose wird mit einem Magnetstativ oder einem Gerät wie dem KingFisher Flex Magnetpartikelprozessor aus der Lösung entfernt. Automatisierte Geräte eignen sich besonders für Aufreinigungsvorgänge mit höherem Durchsatz und das Screening der Aufreinigungsbedingungen.

Merkmale:
Spezifisch — Einzigartige Basis-Beads und hochspezifische Antikörper minimieren die Off-Target-Bindung (geringe unspezifische Bindung)
Hohe Reinheit — Das optimierte Binden-Waschen-Eluieren-Protokoll sorgt für höchste Reinheit
Hohe Ausbeute — Spezielle Antikörperkonjugationsverfahren ermöglicht eine hohe Ausbeute
Schnell — Das gesamte Aufreinigungsprotokoll benötigt normalerweise weniger als 40 Minuten
Wirtschaftlich — Das Aufreinigungsprotokoll ermöglicht eine mehrfache Wiederverwendung
Vielseitig — Die Beads sind kompatibel mit manuellen sowie automatischen Arbeitsabläufen (z. B. mit KingFisher Geräten)

Eigenschaften der Pierce Anti-DYKDDDDK Magnetic Agarose:

Zusammensetzung: Die Anti-DYKDDDDK-Antikörper sind kovalent an einen magnetischen, stark quervernetzten Agarose-Träger gebunden
Magnetisierung: Ferrimagnetisch mit geringer Remanenz
Bead-Größe: 10–40 μm
Bead-Konzentration: 25%ige Suspension in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung, 0,01 % Tween-20 Detergenz, 0,02 % Natriumazid, pH 7,2
Bindungskapazität: ≥ 3,2 mg DYKDDDDK-tGFP-His-Protein (∼32 kDa)/ml abgesetzte Beads