EasyPep™ MS Probenvorbereitungs-Kit
Thermo Scientific™

EasyPep™ MS Probenvorbereitungs-Kit

Erstellen Sie in weniger als vier Stunden mithilfe optimierter EasyPep MS-Probenvorbereitungskits hochwertige proteomische Proben für die MS-Analyse.
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KatalognummerBeschreibung
A45733MS-Probenvorbereitungskit
A40006Mini MS Probenvorbereitungskit
A57864Micro-MS-Probenvorbereitungskit
A45734Maxi Probenvorbereitungskit
A45735Lysepuffer
A57865Peptid-Reinigungsplatte
Katalognummer A45733
Preis (EUR)
2.294,65
온라인 행사
2.415,00
Ersparnis 120,35 (5%)
Each
Beschreibung:
MS-Probenvorbereitungskit
Preis (EUR)
2.294,65
온라인 행사
2.415,00
Ersparnis 120,35 (5%)
Each

Die EasyPep Mini MS-Probenvorbereitungskits ermöglichen die effiziente und reproduzierbare Verarbeitung von kultivierten Säugetierzellen, Geweben und Plasma für die proteomische MS-Analyse. Das Kit enthält vorformulierte Puffer, ein Enzym-Gemisch in MS-Qualität, Peptid-Aufreinigungssäulen und ein optimiertes Protokoll zur Erstellung von MS-kompatiblen Peptidproben in weniger als drei Stunden. Die Kits sind für die Verarbeitung von Proteinproben von 10 bis 100 μg mit einer hohen Ausbeute an MS-fähigen Peptiden optimiert.

Vollständig—enthält vorformulierte Reagenzien für die Lyse durch Verdau sowie Peptid-Aufreinigungssäulen und ein optimiertes Protokoll für bis zu 20 Proben
Optimiert—minimierte Anzahl an Schritten und weniger Zeitaufwand für die Probenverarbeitung durch vereinfachte Protokolle und Reagenzien
Flexibel—Reagenzien und Protokolle wurden mit Zellen, Plasma und Gewebeproben für 10 bis 100 µg-Proben optimiert
Zeitersparnis—von mehr als einem Tag auf weniger als drei Stunden verkürzte Verarbeitungszeit der Probe
Kompatibel—Die Endvorbereitung eignet sich für die direkte MS-Analyse und andere nachfolgende Anwendungen, einschließlich TMT-Markierung.

Die Probenvorbereitung von Peptiden für die MS-Analyse ist aufgrund zahlreicher Schritte und verschiedener Protokolle komplex, was sowohl in Qualität als auch Quantität zu Probenvariabilität führt. Dieses Kit wurde entwickelt, um die Reproduzierbarkeit zu verbessern und gleichzeitig den Vorbereitungs- und Verarbeitungsaufwand zu verringern. Die Anzahl der Schritte und die Verarbeitungszeit wurden durch Zugabe einer Universal-Nuklease zur Reduzierung der Viskosität von Nukleinsäuren (anstelle der Schallexposition), einer schnellen „One-Pot“-Reduktionslösung für die Cystein-Modifikation (Carbamidomethylierung, +57,02) und einem Trypsin/Lys-C Protease-Mix für eine umfassendere Verdauung reduziert. Darüber hinaus enthält das Kit Peptid-Aufreinigungssäulen und Puffer zur Vorbereitung von reinigungsmittelfreien Peptidproben für die MS-Analyse. Die optimierten Reagenzien und das optimierte Protokoll erzeugen hochwertige Peptide, die direkt mit der TMT-Markierung, der Phosphopeptid-Anreicherung oder anderen nachfolgenden Anwendungen kompatibel bzw. bereit für die MS-Analyse sind.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Specifications
BeschreibungMS-Probenvorbereitungskit
EndprodukttypPeptide
Zur Verwendung mit (Geräte)Massenspektrometer
Marker oder FarbstoffUnmarkiert
Menge96 Reaktionen
VersandbedingungNasseis
ArbeitsablaufschrittProteinverdau
NachweisverfahrenMassenspektrometrie
FormatKit
ProduktlinieEasyPep
ProdukttypKit zur Probenvorbereitung
AusgangsmaterialProteinproben
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
  • Lyselösung, 25 ml, bei 4 °C lagern
  • Universelle Nuklease, 25 kU, bei -20 °C lagern
  • Reduktionslösung, 7 ml, bei 4 °°C lagern
  • Alkylierungslösung, 7 ml, bei 4 °°C lagern
  • Enzym-Rekonstitutionslösung, 7 ml, bei 4 °C lagern
  • Pierce Trypsin/Lys-C Protease-Mix, MS-Qualität, 5 x 100 µg, bei -20 °C lagern
  • Verdauungsstopplösung, 7 ml, bei 4 °°C lagern
  • Peptid-Aufreinigungsplatte, 1 pro Pck., bei 4 °C lagern
  • Wasch- und Elutionsplatte, 1 pro Pack., bei 4 °C lagern
  • Probenvorbereitungsplatte, 1 pro Pck., bei 4 °C lagern
  • Waschlösung A, 40 ml, bei 4 °°C lagern
  • Waschlösung B, 3 x 27 ml, bei 4 °C lagern
  • Elutionslösung, 2 x 20 ml, bei 4 °°C lagern

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

Are the EasyPep MS Sample Prep Kits compatible with vacuum pumps/dry-down devices?

As per protocol, peptide samples need to be dried down prior to LC-MS analysis. This step can be performed using vacuum pumps/dry-down devices without any harm caused to the device by the components present in the elution buffer within the EasyPep MS Sample Prep Kits.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Mass Spectrometry Support Center.

I have a lot of plasma samples to prepare for mass spectrometry analysis. Is there a way to perform abundant protein depletion in a 96-well plate?

The bulk Top14 depletion resin is compatible with a 96-well filter plate such as the Agilent filter microplate (Cat. No. 200957-100). Add 600 µL of resin slurry (50%) to each of the wells in the 96-well filter plate, add 10-20 µL of sample, and incubate with gentle shaking. Depleted samples can be collected in a new 96-well polypropylene plate by centrifugation for 2 mins at 1,000 x g or by using a vacuum manifold.

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After cell lysis, my mass spectrometry sample is very viscous and difficult to pipette. How do I reduce the sample viscosity?

High sample viscosity after lysis is due to release of DNA from the nucleus. Sonication or addition of a nuclease such as the Pierce Universal Nuclease (Cat. No. 88700, 88701, or 88702) can be used to degrade DNA and reduce sample viscosity.

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How do I process yeast samples with EasyPep Mini MS Sample prep Kit?

Add 0.5 mm diameter glass beads to the sample pelleted in Easy Pep Lysis Solution and proceed as recommended in the Easy Pep sample prep protocol. Vortex vigorously for few minutes, spin at 16,000 x g for 5 mins, and extract the supernatant for protein assay and further downstream sample preparation.

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How do I process bacterial samples with EasyPep MS Sample Prep kits?

Add 1-2 µL of 50 mg/mL Lysozyme Solution (Cat. No. 90082) to 200 µL of the EasyPep lysis buffer provided in the kit and proceed with the sample prep. Add 200 µL of the prepared lysis solution to 5 X 10E8 bacterial cells (E. coli cells) (OD600 equal to 1, corresponding to 1 X 10E8 CFUs). Lyse by pipetting the sample repeatedly and centrifuge at 16,000 x g for 5 mins. Alternatively, E. coli cells can be lysed in lysis buffer using bead beating or sonication instead of lysozyme. After lysis, dilute samples to 1 mg/mL using lysis buffer, proceed with the EasyPep protocol for reduction, alkylation, digestion, and clean up as described in the product manual.

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Zitierungen und Referenzen (4)

Zitierungen und Referenzen
Abstract
Discovery of Orally Available and Brain Penetrant AEP Inhibitors.
Authors:Krummenacher D,He W,Kuhn B,Schnider C,Beurier A,Brom V,Sivasothy T,Marty C,Tosstorff A,Hewings DS,Mesch S,Pinard E,Brändlin M,Hochstrasser R,Westwood P,Rothe J,Kronenberger A,Morandi F,Gutbier S,Schuler A,Heer D,Gloria LE,Joedicke L,Rudolph MG,Müller L,Grüninger F,Baumann K,Kaniyappan S,Manevski N,Bartels B
Journal:Journal of medicinal chemistry
PubMed ID:38090813
Alzheimer's Disease (AD) is the most widespread form of dementia, with one of the pathological hallmarks being the formation of neurofibrillary tangles (NFTs). These tangles consist of phosphorylated Tau fragments. Asparagine endopeptidase (AEP) is a key Tau cleaving enzyme that generates aggregation-prone Tau fragments. Inhibition of AEP to reduce the ... More
Development of a First-in-Class RIPK1 Degrader to Enhance Antitumor Immunity.
Authors:Wang J,Lu D,Yu X,Qi X,Lin H,Holloman BL,Jin F,Xu L,Ding L,Peng W,Wang M,Chen X
Journal:Research square
PubMed ID:38659866
The scaffolding function of receptor interacting protein kinase 1 (RIPK1) confers intrinsic and extrinsic resistance to immune checkpoint blockades (ICBs) and has emerged as a promising target for improving cancer immunotherapies. To address the challenge posed by a poorly defined binding pocket within the intermediate domain, we harnessed proteolysis targeting ... More
Proteomic Characterization of Transfusable Blood Components: Fresh Frozen Plasma, Cryoprecipitate, and Derived Extracellular Vesicles via Data-Independent Mass Spectrometry.
Authors:Hwang JH,Lai A,Tung JP,Harkin DG,Flower RL,Pecheniuk NM
Journal:Journal of proteome research
PubMed ID:39254217
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Targeted sulfur(VI) fluoride exchange-mediated covalent modification of a tyrosine residue in the catalytic pocket of tyrosyl-DNA phosphodiesterase 1.
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Journal:Communications chemistry
PubMed ID:39284936
Developing effective inhibitors of the DNA repair enzyme tyrosyl-DNA phosphodiesterase 1 (TDP1) has been challenging because of the enzyme shallow catalytic pocket and non-specific substrate binding interactions. Recently, we discovered a quinolone-binding hot spot in TDP1's active site proximal to the evolutionary conserved Y204 and F259 residues that position DNA. ... More