Alexa Fluor™ 647 Tyramide SuperBoost™ Kit, goat anti-rabbit IgG

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Invitrogen™

Alexa Fluor™ 647 Tyramide SuperBoost™ Kit, goat anti-rabbit IgG

Katalognummer	Menge
B40926	150 Objektträger

Katalognummer B40926

Preis (EUR)

627,65

キャンペーン価格

682,00

Ersparnis 54,35 (8%)

Menge:

150 Objektträger

Preis (EUR)

627,65

キャンペーン価格

682,00

Ersparnis 54,35 (8%)

Die SuperBoost™ Tyramid-Signalamplifikation ist die empfindlichste Methode zum Nachweis von schwach konzentrierten Targets in der Multiplex-fähigen Fluoreszenz-Immunozytochemie (ICC), Immunhistochemie (IHC) und In-situ-Hybridisierung (ISH). SuperBoost-Sets kombinieren die Helligkeit von AlexaFluor™ Farbstoffen mit der überlegenen Signalverstärkung einer poly-HRP-vermittelten Tyramid-Markierungsreaktion, um eine Empfindlichkeit von 10 bis 200 Mal höher als bei Standardmethoden zu erzielen. Die Empfindlichkeit des SuperBoost-Kits ist auch 2 bis 10 Mal höher als bei normalen Tyramid-Amplifikationstechniken wie TSA™. SuperBoost-Sets verbessern Ihre Ergebnisse für eine klare Übersicht über entscheidende Bereiche, die von Standard-Bildgebungsverfahren nicht erkannt werden können.

SuperBoost-Sets sind einfach zu verwenden und einfach an die Standard-ICC-, IHC- oder FISH-Versuchsprotokolle anzupassen, wobei jede Zelle oder jeder Gewebetyp verwendet wird. Zellen, die mit einem Super Boost-Kit gekennzeichnet sind, können mit jedem Mikroskop abgebildet werden, wodurch hochauflösende Multiplex-Bilder erzeugt werden. Dieses spezielle Kit enthält Alexa Fluor 647 Tyramid (650/688 Ex/Em), das mit einem Standard-Dunkelrot/Cy5-Filterwürfel erkannt wird. Dieses Kit enthält außerdem poly-HRP-konjugierte Ziege-Anti-Kaninchen-IgG-Sekundärantikörper.

Zu den Merkmalen der SuperBoost-Kits gehören:
• Sehr hohe Empfindlichkeit für den Nachweis von niedrig konzentrierten oder schwer nachweisbaren Targets durch Fluoreszenz-Bildgebung
• Einfaches Protokoll und Nachweis mit Standardfiltern
• Geeignet für hochauflösende Multiplex-Bilder – Co-Markierung mit DAPI, Sekundärantikörpern und anderen SuperBoost-Kits
•Erfordert 10 bis 100 Mal weniger Primärantikörper als Standard-ICC/IHC/ISH-Experimente

SuperBoost-Kits basieren auf dem Tyramid-Signalamplifikationssystem, das die katalytische Aktivität der Meerrettich-Peroxidase (HRP) verwendet, um eine High-Density-Markierung eines Zielproteins oder einer Nukleinsäuresequenz in situ zu erzeugen. Ein typisches ICC/IHC/ISH-Experiment mit einem SuperBoost-Kit erfordert 10–100 Mal weniger primären Antikörper als Standard-ICC/IHC/ISH-Experimente. SuperBoost Kits bieten eine überlegene spezifische Signalintensität über dem Hintergrund, sodass das Protokoll einfach optimiert wird, um spezifische Signale in Proben nachzuweisen, bei denen eine hohe endogene Autofluoreszenz beobachtet wird.

Vorteile der SuperBoost-Kits

Verbessertes Signal mit Alexa Fluor Tyramiden: SuperBoost-Sets verwenden Alexa Fluor Tyramide, die mit HRP reagieren und hellen und lichtstabilen Alexa Fluor Farbstoff auf umgebenden Proteinen und anderen ähnlichen Molekülen ablagern. SuperBoost Kits sind die einzigen Kits, die die Helligkeit der Alexa Fluor-Farbstoffe mit der Verbesserung der Tyramid-Signalverstärkung kombinieren, um ein überlegenes Signal zu erzeugen.

Poly-HRP-Verstärkung: Im Gegensatz zu TSA verwenden SuperBoost Kits polyHRP-konjugierte Sekundärantikörper. In solchen Systemen werden mehrere HRP-Enzyme mit kurzen Polymeren konjugiert, wodurch das Signal im Vergleich zu regulären HRP-Systemen mehrfach verstärkt wird. Das Poly-HRP ist so strukturiert, dass die Antikörper Zellen oder Gewebe genauso effizient durchdringen wie reguläre HRP-konjugierte Sekundärantikörper. Das Verhältnis von Molarenzym/Antikörperprotein hat einen Durchschnittswert von '4'.

Reaktionsstopplösung: Wie bei jedem enzymbasierten Markierungssystem kann es zu einer Überentwicklung des Signals kommen. SuperBoost-Sets enthalten eine HRP-Stopplösung, um die HRP-Reaktion anzuhalten. HRP-Stopplösung kann verwendet werden, um ein maximales Signal zu erhalten, ohne das Hintergrundsignal zu erhöhen. Bilder, die mit optimierten HRP-Reaktionszeiten erstellt werden, sind genauso scharf wie Bilder, die mit Standard-ICC/IHC/ISH-Methoden, aber mit 10- bis 200-facher Empfindlichkeit erstellt wurden.

Reduktion von Hintergrund: SuperBoost-Sets beinhalten Blocker zur Eliminierung oder Reduktion von endogener Peroxidase und fluoreszierenden Hintergrundsignalen. Diese Blocker tragen dazu bei, dass nur bestimmte Signale verstärkt werden, während nicht-spezifische und Hintergrundsignale überprüft werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.

Specifications

ProdukttypTyramid-Kit

Menge150 Objektträger

Haltbarkeit6 Monate

VersandbedingungZugelassen für den Versand bei Raumtemperatur oder auf nassem Eis, Zugelassen für den Versand bei Raumtemperatur oder auf nassem Eis

KonjugatAlexa Fluor 647, Alexa Fluor™ 647

ProduktlinieSuperBoost

Unit SizeEach

Inhalt und Lagerung

1 Kit ausreichend für 150 Mikroskopobjektträger (18 x 18 mm), mit:

• Blockierpuffer (1x), 22,5 ml
• Poly-HRP-konjugierter Ziege-Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper (1x), 22,5 ml
• Alexa Fluor Tyramid-Reagenz
• Wasserstoffperoxid (stabilisierte 3%ige Lösung), 28,5 ml
• Reaktionspuffer (20x), 6 ml
• Reaktionsstopplösung, 8 mg
• Dimethylsulfoxid (DMSO), 200 µl

Bei 2 bis 8 °C lagern Bei vorschriftsmäßiger Lagerung ist dieses Produkt bis 6 Monate nach Erhalt stabil.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

With a SuperBoost tyramide kit, I got excessive and non-specific labeling. What can I do to limit background and acquire a more localized labeling?

To limit background, we recommend performing a pre-blocking step with 3% H2O2 for 60 mins to inactivate endogenous peroxidases. To limit the localization of labeling, we recommend optimizing the final concentration of the primary and secondary antibodies and the dye-tyramide. You may also limit the incubation time of the dye-tyramide on the sample.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

Is it possible to perform dual TSA labeling with SuperBoost tyramide kits?

Yes. This involves the sequential application of the antibodies and the tyramides with a HRP-quenching step between antibodies using H2O2.

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How are SuperBoost tyramide kits different from the original TSA labeling kits?

The SuperBoost tyramide kits utilize poly-HRP labeled antibodies. This provides a greater number of horseradish peroxidase (HRP) molecules per antibody. The original kits used antibodies and streptavidin that were directly conjugated with HRP and thus, limited the number per antibody or streptavidin.

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I used a neuron-specific antibody to label my neurons. I can't get enough signal from my fluorescent dye conjugated primary antibody. What can I do to improve it?

Here are our recommendations:

Use one of our extensive selection of secondary antibodies conjugated to bright, photostable Alexa Fluor dyes. The degree of labeling for each conjugate is 2-8 fluorophores per IgG molecule, with potentially three secondary antibody-binding sites per primary antibody, providing signal amplification of approximately 10-20 fluorophores per primary antibody.
Alternatively, primary antibody labeling can be detected with a biotinylated secondary antibody in conjunction with either a fluorescent streptavidin or a streptavidin bridge followed by a biotinylated reporter such as Qdot biotin. Although processing times increase with additional incubation and endogenous biotin-blocking steps, detection sensitivity also improves as a result of the labeled streptavidin.
For low-abundance targets, signal amplification may be necessary for optimal signal-to-noise ratios. Tyramide signal amplification (TSA) is an enzyme-mediated detection method that utilizes the catalytic activity of horseradish peroxidase (HRP) to generate reactive fluorophore-labeled tyramide radicals. These short-lived tyramide radicals covalently couple to nearby residues, producing an amplified fluorescent signal localized at the HRP-target interaction site.
For improved detection sensitivity with rapidly bleaching dyes, our SlowFade Diamond or ProLong Diamond antifade reagents have been shown to increase photostability and reduce initial fluorescence quenching in fixed cells, fixed tissues, and cell-free preparations.
Please review this web page for further optimization tips (https://www.thermofisher.com/us/en/home/references/newsletters-and-journals/bioprobes-journal-of-cell-biology-applications/bioprobes-issues-2011/bioprobes-66-october-2011/guide-to-immunocytochemistry.html).

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I have a very low-abundance antigen. How can I amplify my signal?

A common method for amplifying antibody detection is biotin-streptavidin detection, where a biotinylated secondary antibody is combined with subsequent labeling with a dye-conjugated streptavidin. This will amplify the signal by approximately 2-8 times, but endogenous biotin must be blocked beforehand. Another option is to use tyramide-signal amplification, where a horseradish peroxidase conjugate is used with a dye-labeled tyramide. This will amplify the signal by approximately 10-20 times, but endogenous peroxidase will need to be blocked. A final option may be to use a Qdot nanoparticle antibody or streptavidin conjugate, which can yield a signal as much as 40 times higher than a standard organic dye conjugate, depending on the Qdot color.

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Zitierungen und Referenzen

Abstract

Human liver-kidney model elucidates the mechanisms of aristolochic acid nephrotoxicity.

Authors:Chang SY, Weber EJ, Sidorenko VS, Chapron A, Yeung CK, Gao C, Mao Q, Shen D, Wang J, Rosenquist TA, Dickman KG, Neumann T, Grollman AP, Kelly EJ, Himmelfarb J, Eaton DL,

Journal:JCI Insight

PubMed ID:29202460

Environmental exposures pose a significant threat to human health. However, it is often difficult to study toxicological mechanisms in human subjects due to ethical concerns. Plant-derived aristolochic acids are among the most potent nephrotoxins and carcinogens discovered to date, yet the mechanism of bioactivation in humans remains poorly understood. Microphysiological ... More

Optimization of prostate cancer cell detection using multiplex tyramide signal amplification.

Authors:Roy S, Axelrod HD, Valkenburg KC, Amend S, Pienta KJ

Journal:J Cell Biochem

PubMed ID:30390333

Approximately 29?000 men die of prostate cancer (PCa) each year in the United States, and 90% to 100% of them are due to incurable bone metastasis. It is difficult to determine (1) when PCa disseminates in the natural history of the disease; (2) where cancer cell disseminates before becoming overt ... More