One Shot™ PIR1 chemisch kompetente E. coli

Das Echo™ Klonierungssystem ist ein Zwei-Vektor-System, das das spezifische Cre-lox-Rekombinationssystem von Bakteriophagen P1 (1,2) für schnelles Klonen in mehrere Vektoren verwendet. Ihr Gene von Interesse wird in einen der speziell entwickelten Spendervektoren geklont, der dann mit beliebig vielen verschiedenen Echo™ Akzeptorvektoren rekombiniert werden kann. Die Spender- und Akzeptorvektoren werden in einem Puffer platziert, der Cre-Rekombinase für eine 25 Minuten dauernde In-vitro-Rekombinationsreaktion enthält. Cre verbindet die auf jedem Vektor vorhandene Loxstelle, bringt die DNA-Stränge zusammen, spaltet sie und bindet sie kovalent wieder an. Das Endresultat ist eine Fusion der Donor- und Empfängervektoren und zur Bildung eines einzigen, funktionalen Expressionsvektors
PIR1-kompetente Zellen dienen dem Klonen und der Wartung Ihrer Spendervektor-Konstruktion (d. h. PUniV5/His-TOPO™) (oder eines anderen Vektors, der den R6K-Gamma-Ursprung enthält). Enthält ein mutiertes Allel des pir-Gens, das für ein Donorvektorkonstrukt von ∼ 250 Kopien pro Zelle sorgt.