CellLight™ Null (control), BacMam 2.0

CellLight™ Nullkontrolle ist als negative Transduktionskontrolle für unsere CellLight™ fluoreszierenden Protein Färbereagenzien für lebende Zellen vorgesehen. Die CellLight™ Nullkontrolle enthält keinen Promoter von Säugetieren und kein Transgen. CellLight Reagenzien™ kombinieren die Nützlichkeit und Selektivität fluoreszierender Proteine mit der Transduktionseffizienz der BacMam Technologie und ermöglichen so eine eindeutige Färbung von Organellen, zellulären Strukturen und Prozessen in lebenden Säugetierzellen. Lieferung in in einem gebrauchsfertigen Format—einfach dazugeben, inkubieren und visualisieren—mit hocheffizienter Expression in Zelllinien, Primärzellen, Stammzellen und Neuronen.

CellLight™ Nullkontrolle ist:

• Hocheffizient: >90 % Transduktion bei einer Vielzahl von Säugetierzelllinien, einschließlich Primärzellen, Stammzellen und Neuronen
• Schnell und bequem: Fügen Sie einfach CellLight™ Nullkontrollreagenz zu Ihren Zellen hinzu, inkubieren Sie über Nacht und beurteilen Sie, wie gut Ihre Zellen BacMam Transduction vertragen
• Sicher: CellLight Reagenzien™ sind nicht-replizierend in Säugetierzellen, weisen keinen beobachtbaren zytopathischen Effekt auf und eignen sich für die Handhabung auf Biosicherheitsstufe (BSL) 1

CellLight™ Reagenzien Prinzip
Andere CellLight™ Reagenzien sind Fusionskonstrukte von Signalpeptiden oder Zellstrukturproteinen mit erstklassigem emGFP, TagRFP oder CFP für präzises und spezifisches Targeting auf subzelluläre Kompartimente und Strukturen. Eine Vielzahl von Zielen, einschließlich Zytoskelett, Mitochondrien und sekretorische Kompartimente, stehen für bequemes Multiplexing, Co-Lokalisationsstudien und die Bildgebung dynamischer zellulärer Prozesse zur Verfügung, bei denen eine hohe räumliche und zeitliche Auflösung erforderlich ist. Die CellLight™ Reagenzien tolerieren die Fixierung mit Formaldehyd und sind daher mit der Festzellanalyse kompatibel.

BacMam Technologie
Die BacMam Technologie basiert auf einem Insektenvirus (Baculovirus) für effiziente Transduktion und transiente Expression in Säugetierzellen. Das Baculovirus wurde so modifiziert, dass es eine Expressionskassette mit dem CellLight™ Fusionskonstrukt enthält.

BacMam 2.0 enthält Elemente, die helfen, die Transduktionseffizienz und Expressionswerte erheblich verbessern: Ein pseudotypiertes Capsid-Protein für eine effizientere Zelleingabe, einen verbesserten CMV-Promotor und das Woodchuck Hepatitis-post-transkriptionale regulatorische Element (WPRE).

Baculoviren replizieren sich nicht in Säugetierzellen und haben somit ein ausgezeichnetes Sicherheitsprofil und keinen zytopathischen Effekt auf Zellen.

Praktischer Workflow
Im Gegensatz zu Expressionsvektoren ermöglichen BacMam Reagenzien titrierbare und reproduzierbare transiente Proteinexpression. Harte Transfektionsmethoden oder langwieriges Klonen sind nicht erforderlich. Um selbst in empfindlichen Zellen wie Stammzellen, Neuronen und Primärzellen eine hocheffiziente Expression zu erzielen, fügen Sie CellLight™ Reagenzien einfach den Zellen in einem vollständigen Medium hinzu, inkubieren und visualisieren Sie dann am nächsten Tag. Alternativ können Sie das CellLight™ Reagenz zum Zeitpunkt der Ausplattierung mit den Zellen mischen.

Die Ko-Transduction-Effizienz ist hoch, sodass mehrere CellLight™ Reagenzien problemlos im selben Experiment verwendet werden können, wenn mehrere Strukturen oder Pfade markiert werden müssen. CellLight™ Reagenzien tolerieren auch die Fixierung mit Formaldehyd und sind somit mit antikörperbasierter Festzellanalyse kompatibel.

Typischerweise exprimieren transient transduzierte Zellen etwa fünf Tage lang Fusionsprotein, obwohl in langsam teilenden Zellen, wie beispielsweise einigen primären Zelltypen, Expression bis zu zwei Wochen lang nachgewiesen wurde; in den am Ende differenzierten Neuronen haben wir mehr als drei Wochen nach der Transduktion Bilder aufgenommen.