Click-iT™ Plus TUNEL-Assay-Kits für In Situ Apoptose-Detektion
Click-iT™ Plus TUNEL-Assay-Kits für In Situ Apoptose-Detektion
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Click-iT™ Plus TUNEL-Assay-Kits für In Situ Apoptose-Detektion

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Nachweis von Apoptose in Zellen und Gewebeproben mit Click-iT Plus TUNEL Assay-Kits, die eine einfache Farbstoffeinarbeitung und ein Multiplexing mit GFP und RFP ermöglichen.
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KatalognummerFarbeMarker oder Farbstoff
C10617GrünAlexa Fluor™ 488
C10618RotAlexa Fluor™ 594
C10619TiefrotAlexa Fluor™ 647
Katalognummer C10617
Preis (EUR)
691,65
Online Exclusive
760,00
Ersparnis 68,35 (9%)
Each
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Farbe:
Grün
Marker oder Farbstoff:
Alexa Fluor™ 488
Preis (EUR)
691,65
Online Exclusive
760,00
Ersparnis 68,35 (9%)
Each
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Mit dem Click-iT Plus TUNEL-Assay für den In Situ-Apoptosenachweis, der Alexa Fluor 488, 594 und 647 fluoreszierende Farbstoffoptionen bietet, können Sie mehr apoptotische Zellen in Gewebe- und Zellkulturproben nachweisen. Dieses In-situ-Apoptose-Nachweiskit ist für Gewebe- oder Zellproben optimiert und ermöglicht das Multiplexing der Farbstoffe mit anderen Farbstoffen oder Proteinen, wie GFP und RFP, und lassen sich aufgrund ihrer kleineren Größe (im Vergleich zu Antikörpern) leichter in komplexe Moleküle integrieren. Dieses TUNEL-Assay-Kit ist ebenfalls sehr flexibel und zum Testen von 1 bis 50 Proben in einem einzigen Experiment verwendbar.
Click-iT Plus TUNEL Alexa Fluor 488, 594 und 647 Assays für den In-situ-Apoptosenachweis können apoptotische Zellen in Gewebe- und Zellkulturproben nachweisen, indem sie eine kleine, hochgradig spezifische Markierung und einen hellen Fluoreszenzfarbstoff einarbeiten. Nach Einarbeitung des Markierungsanteils in DNA-Fragmente erfolgt der Nachweis über eine katalysierte „Klick“-Reaktion unter Bedingungen, die das emittierte Fluoreszenzsignal von GFP oder RFP erhalten.

Weitere Vorteile des Click-iT Plus TUNEL-Assays für den In-Situ-Apoptosenachweis:
• Optimiert für den Nachweis apoptotischer Zellen in Gewebe- oder Zellproben
• Multiplex-fähig: Optimiert für die Arbeit mit fluoreszierenden Farbstoffen oder Proteinen wie GFP und RFP
• Verbesserter TUNEL-Assay: Besserer Einbau der Markierung dank eines kleinen reaktiven Anteils
• Helle apoptotische Signale: nutzt Alexa Fluor Farbstoffe, die ein stabiles Fluoreszenzsignal ohne Photobleichung erzeugen
• Flexibilität: Assay ist für gleichzeitige Tests von 1 bis 50 Proben verwendbar

Fragmentierung der zellulären DNA ist ein Kennzeichen von Apoptose. Der TUNEL-Assay ist die am weitesten verbreitete Methode zum Nachweis fragmentierter DNA in apoptotischen Zell- oder Gewebeproben. Der TUNEL-Assay beginnt durch den Einbau modifizierter dUTP am 3'-OH Ende der fragmentierten DNA. Die dUTP-Modifikation besteht oftmals in der Kopplung eines Fluorophors. Aufgrund der Größe des Fluorophors kann das modifizierte dUTP niedrigere als erwartete Einarbeitungsraten aufweisen, was sich auf die Empfindlichkeit des TUNEL-Assays auswirken kann. Zudem weisen viele der in derzeit verfügbaren TUNEL-Assay-Kits enthaltenen Fluorophore Probleme mit Photobleichung und Fluoreszenzspektralüberlappungen auf, die beide die Empfindlichkeit und Multiplex-Möglichkeiten des Assays einschränken.

Der Click-iT Plus TUNEL-Assay soll diese Probleme umgehen. Der Assay verwendet dUTP, modifiziert mit einer Alkingruppe (eine kleine bioorthogonale funktionelle Gruppe), wodurch die Nukleotide leichter aufgenommen werden. Nach dem Einbau führt eine hochgradig spezifische „Klick“-Reaktion zwischen der Alkingruppe und einem Alexa Fluor Picolylazid-Fluoreszenzfarbstoff mit anschließendem Nachweis dieses Farbstoffs zu einem empfindlichen und spezifischen Assay für die Erkennung apoptotischer Zellen oder Gewebeproben. Aufgrund der schonenden Reaktionsbedingungen ermöglicht der Click-iT Plus TUNEL-Assay das Multiplexing mit fluoreszierenden Proteinen oder Farbstoffen.

Der Click-iT Plus TUNEL-Assay wurde validiert mit mehreren verschiedenen Formalin-fixierten, Paraffin-eingebetteten Gewebetypen. In allen Fällen ist das Multiplexing mit fluoreszierenden Proteinen und Farbstoffen möglich. Auch die Aktinfärbung mit fluoreszenzmarkiertem Phalloidin ist möglich.

Der Click-iT Plus TUNEL-Assay enthält alle erforderlichen Reagenzien zum Nachweis apoptotischer Zellen in Gewebe- oder Zellproben. Die Reagenzien in diesem Kit reichen zum Testen von 50 Proben und können für die gleichzeitige Analyse von 1 bis 50 Proben verwendet werden.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Specifications
FarbeGrün
BeschreibungClick-iT Plus TUNEL-Assay für den In-Situ-Apoptosenachweis, Alexa Fluor™ 488 Farbstoff
Anregung/Emission490/525
Zur Verwendung mit (Geräte)Fluoreszenzmikroskop
Umweltfreundliche EigenschaftenWeniger gefährlich
MarkertypAlexa Fluor™ Farbstoffe
Marker oder FarbstoffAlexa Fluor™ 488
Anzahl Reaktionen50 Deckgläser
ProduktlinieClick-iT
ProdukttypTUNEL Assay
Menge1 kit
VersandbedingungTrockeneis
LagerungsbedingungenBei ≤ 20°C lagern und vor Licht schützen.
NachweisverfahrenFluoreszenz
FormatDeckglas
Unit SizeEach

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

What is the excitation/emission maxima of the Alexa Fluor 488 dye?

Alexa Fluor 488 has fluorescence excitation and emission maxima of 495/519 nm.

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I will be performing a cell proliferation assay using Click-iT EdU kit. At what point can I stop overnight, or do I have to perform all the steps continuously?

One may store the sample after fixation overnight in PBS at 4oC. For longer storage (<1 week) , store in buffer with 1-2% formaldehyde or in formalin to limit microbial growth. If you use sodium azide as a microbial inhibitor, it must be completely removed prior to the Click-iT reaction.

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I need to test cells for apoptosis after they have been formaldehyde-fixed and permeabilized. What dye or conjugate do you recommend? Will Annexin V conjugates work?

We do not recommend Annexin V for post-fix labeling, since fixation inactivates the function of the translocase; fixed samples would show mostly uniform labeling with Annexin V. The only options you have for apoptosis assays after fixation are to use an anti-caspase antibody or perform a TUNEL assay, such as with the Click-iT TUNEL Imaging kits.

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Can I use Click-iT TUNEL Alexa Fluor Imaging Assays for Microscopy & HCS (Cat. No. C10246) for flow cytometry?

We have not validated the use of Click‐iT TUNEL assay for flow cytometry. Theoretically, any Click‐iT TUNEL assay for imaging can be adapted to be used with flow cytometry. In general, follow the protocol as provided but spin down the suspension cells after every step. Start with about 10∧6 cells at about 10∧7 cell/mL. Please note that flow cytometry is more sensitive than fluorescence imaging, so you should use between 1/5th to 1/10th of the azide dye detection reagent in the click reaction. All other concentrations of the click reaction reagents should stay the same. We recommend using the Click‐iT Plus TUNEL assays (C10617, C10618, C10619), as the detection reagent is provided in a separate vial, enabling you to modify the concentration used. The Click‐iT Plus TUNEL assay protocol can be found on the following link.

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Can I use Click-iT Plus TUNEL Assay Kits for In Situ Apoptosis Detection (Cat. Nos. C10617, C10618, C10619) for whole mount immunofluorescence staining of zebrafish larvae?

Yes. The Click-iT Plus TUNEL Assay Kits for In Situ Apoptosis Detection (Cat. Nos. C10617, C10618, C10619) is optimized for use with tissues and should work on zebrafish larvae, although it has not been internally validated with zebrafish larvae.

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Zitierungen und Referenzen (9)

Zitierungen und Referenzen
Abstract
Signaling and physiological activity of the NO-donating agent TNICthio in human blood lymphocytes, Jurkat and MCF7 cell lines.
Authors:Vasilieva SV, Petrishcheva MS, Yashkina EI, Osipov AN
Journal:Mol Biol Rep
PubMed ID:30637625
'Signaling and physiological activities of the crystalline tetranitrosyl iron complex with thiosulfate-a NO-donor (TNICthio) were first studied on human cells in conditions of mono and combined application of H' ... More
Characterization of NvLWamide-like neurons reveals stereotypy in Nematostella nerve net development.
Authors:Havrilak JA, Faltine-Gonzalez D, Wen Y, Fodera D, Simpson AC, Magie CR, Layden MJ
Journal:Dev Biol
PubMed ID:28888696
The organization of cnidarian nerve nets is traditionally described as diffuse with randomly arranged neurites that show minimal reproducibility between animals. However, most observations of nerve nets are conducted using cross-reactive antibodies that broadly label neurons, which potentially masks stereotyped patterns produced by individual neuronal subtypes. Additionally, many cnidarians species ... More
The Antidiabetic Drug Lobeglitazone Protects Mice From Lipogenesis-Induced Liver Injury via Mechanistic Target of Rapamycin Complex 1 Inhibition.
Authors:Lee YS, Park JS, Lee DH, Lee DK, Kwon SW, Lee BW, Bae SH
Journal:Front Endocrinol (Lausanne)
PubMed ID:30298052
Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is a metabolic disorder closely linked with type II diabetes (T2D). The progression of NAFLD is associated with the induction of lipogenesis through hyperactivation of the mechanistic target of rapamycin complex 1 (mTORC1) pathway. An increase in lipogenesis induces endoplasmic reticulum (ER) stress and accelerates ... More
Inhibition of WNT7A-ß-catenin signaling pathway sensitizes oral squamous cell carcinoma to cisplatin.
Authors:Tian J, Cui X, Feng Y, Gu L
Journal:Int J Clin Exp Pathol
PubMed ID:31949568
Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the most common type and most threatening head and neck cancer worldwide. Here, we aim to study the relationship between the WNT7A-ß-Catenin signaling pathway and the chemotherapy resistance of OSCC patients. We analyzed 42 OSCC patients and 19 adjacent non-tumor tissues, evaluated the expression ... More
Small Molecule GSK-J1 Affects Differentiation of Specific Neuronal Subtypes in Developing Rat Retina.
Authors:Raeisossadati R, Móvio MI, Walter LT, Takada SH, Del Debbio CB, Kihara AH
Journal:Mol Neurobiol
PubMed ID:29981055
Histone post-translational modification has been shown to play a pivotal role in regulating gene expression and fate determination during the development of the central nervous system. Application of pharmacological blockers that control histone methylation status has been considered a promising avenue to control abnormal developmental processes and diseases as well. ... More