Das Click-iT™ TUNEL Colorimetric IHC Detection Kit dient zur Identifizierung apoptotischer Zellen in Gewebe- und kultivierten Zellproben durch die Verwendung eines kleinen, hochspezifischen Beschriftungsriegels und Streptavidin-Peroxidase-Konjugation. Nach der Integration der Markierung in DNA-Fragmentierungsstellen wird die Detektion durch eine katalysierte Klickreaktion erreicht, die an diesen Stellen eine Biotin-Gruppe hinzufügt. Die anschließende Zugabe eines Streptavidin-Peroxidase- und Peroxidase-Substrats führt zu einem dunkelbraunen Signal, das mit Lichtmikroskopie erkannt und für zukünftige Analysen gespeichert werden kann.

Weitere Hilfsmittel für den bildbasierten Nachweis von apoptotischen Zellen >

• Optimiert für die Erkennung von apoptotischen Zellen entweder in Gewebe- oder Zellproben
• Verbesserter kolorimetrischer TUNEL-Assay: Bessere Markierungsintegration dank eines kleinen reaktiven Anteils
• Erhöhte Empfindlichkeit: Spezifische Markierungsintegration führt zu einem niedrigeren Hintergrund und helleren Signal
• Inhaltsreiche Ergebnisse: Zell-Morphologie, die zelluläre Umgebung und das apoptotische Signal sind deutlich sichtbar
• Flexibilität: Das Assay kann für 50 unabhängige TUNEL-Apoptosetests konfiguriert werden.

Die späteren Phasen der Apoptose sind durch Veränderungen in der nuklearen Morphologie, Kondensation des Kernchromatins, Kernhüllenzersetzung und DNA-Fragmentierung gekennzeichnet. Die TUNEL-Assays (Terminal Desoxynucleotidyl-Transferase-dUTP Nick End Labeling) basieren auf der Einbindung modifizierter dUTPs durch die Terminus-Desoxynucleotidyl-Transferase (TdT) an den 3’-OH-Enden fragmentierter DNA. Kolorimetrische TUNEL-Assays verwenden dUTPs, die mit einem Biotin-Anteil konjugiert sind, gefolgt von einem Streptavidin-Peroxidase-Konjugat und einem Peroxidase-Substrat, was zu einem dunkelbraunen apoptotischen Signal führt. Kolorimetrische TUNEL-Assays sind jedoch anfällig für hohen Hintergrund, was die Empfindlichkeit und Spezifität des Signals verringert.

Das Click-iT TUNEL kolorimetrische IHC-Detektionskit wurde entwickelt, um diese Probleme zu beheben, indem ein dUTP verwendet wurde, das mit einer Alkingruppe (einer kleinen bio-orthogonalen Funktionsgruppe) modifiziert wurde, die eine bessere Integration des Nukleotids durch TdT ermöglicht. Nach der Eingemeindung verbindet eine hochspezifische Klickreaktion kovalent Biotin Azid und die Alkyne-Gruppe. Streptavidin-Peroxidase (Meerrettichperoxidase), gefolgt von Peroxidase-Substrat (DAB), ermöglicht den kolorimetrischen Nachweis apoptotischer Zellen. Die hohe Markierungsspezifität der Click-Technologie führt zu einem niedrigen Hintergrund und verbessert den Nachweis apoptotischer Zellen.

Das Click-iT TUNEL kolorimetrische IHC-Detektionskit wurde optimiert und enthält alle Reagenzien für den Nachweis apoptotischer Zellen aus Gewebe- oder Zellproben. Die Reagenzien in diesem Kit reichen zum Testen von 50 Proben und können für die gleichzeitige Analyse von 1 bis 50 Proben verwendet werden.