Click-iT™ Plus EdU Zellproliferationskit für Bildgebung, Alexa Fluor™ 488 Farbstoff

Click-iT Plus EdU EdU Cell Proliferation Bildgebungs-Kits wurden für Fluoreszenzmikroskopie-Anwendungen optimiert und sind eine hervorragende Alternative zu herkömmlichen Proliferationsassays. In diesem Assay wird das modifizierte Thymidin-Analogon-EDU (5-Ethynyl-2‘-Desoxyuridin, ein Nukleosid-Analogon von Thymidin) effizient in die neu synthetisierte DNA integriert und fluoreszierend mit einem hellen, photostabilen Alexa Fluor™ Farbstoff in einer schnellen, hochspezifischen, milden Klickreaktion markiert.

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• Einfach – Funktioniert beim ersten Mal und in kürzerer Zeit als herkömmliche Methoden
• Effizient – Keine Denaturierungsschritte oder harsche Behandlung erforderlich
• Aussagekräftige Ergebnisse – Verbesserte Erhaltung der Zellmorphologie, der Antigenstruktur, des GFP-Fluoreszenzsignals und der DNA-Integrität
• Gleichbleibend – Unabhängig von variablen Antikörperchargen für den Nachweis

Das Kit enthält alle Komponenten, die für die Kennzeichnung und den Nachweis der integrierten EdU sowie für die Durchführung von Zellzyklus-Analysen an Proben adhärenter Zellen erforderlich sind. Für die Zellzyklus-Analyse enthält das Kit den blauen Fluoreszenz-Farbstoff Hoechst 33342. Das Kit enthält genügend Reagenzien für die Markierung von 50 18 x 18-Deckgläsern mit 500 µl Reaktionspuffer pro Test.

Vermeiden Sie die harten Behandlungen der BrdU-Methode
Die Messung von Veränderungen bei der Zellproliferation ist eine grundlegende Methode zur Beurteilung der Zellgesundheit, zur Bestimmung der Genotoxizität und zur Bewertung von Krebsmedikamenten. Die präziseste Methode ist die direkte Messung der DNA-Synthese. Die traditionelle Methode nutzt das Nukleosid-Analogon BrdU (5-Brom-2'-Desoxyuridin, ein Nukleosid-Analogon von Thymidin), das in neu transkribierte DNA eingebaut wird. Nach dem Einbau werden die Proben mit aggressiven Methoden behandelt (HCl, Hitze oder Enzyme), um die DNA zu denaturieren und die BrdU-Moleküle für den Nachweis mit Anti-BrdU-Antikörpern zu exponieren. Allerdings ist die BrdU-Methode zur Messung der Zellproliferation zeitaufwendig und ihre konsistente Durchführung schwierig. Die für diese Methode erforderlichen harten Behandlungen können die Probenintegrität, Zellmorphologie, Bildqualität und Multiplexfähigkeit beeinträchtigen.

Der Click-iT™ Plus EdU-Assay misst die Rate der neuen DNA-Synthese basierend auf dem Einbau des Nukleosid-Analogons EdU in die DNA. Der Nachweis erfolgt über eine katalysierte „Klick“-Reaktion, die normalerweise innerhalb von 30 Minuten abgeschlossen ist. Die Click-Reaktion nutzt bioorthogonale (biologisch eindeutige) Anteile, die proliferierende Zellen fluoreszierend markieren und einen geringen Hintergrund und eine hohe Nachweisempfindlichkeit erzeugen. Wegen der schonenden Reaktionsbedingungen können die Click-iT™ Plus Assays die Zellproliferation genau bestimmen, während die Zellmorphologie, DNA-Integrität, Antigen-Bindungsstellen und das GFP-Fluoreszenzsignal erhalten bleiben. Der Erhalt der DNA-Integrität ermöglicht die DNA-Färbung, einschließlich der Färbung mit Farbstoffen für die Zellzyklus-Analyse.