BODIPY™ TMR-X NHS Ester (Succinimidyl Ester)

BODIPY™ TMR-X ist ein leuchtend orange fluoreszierender Farbstoff mit ähnlicher Erregung und Emission wie Tetramethyrhodamin (TRITC) oder Alexa Fluor™ 555 Farbstoff. Es hat einen hohen Extinktionskoeffizienten und eine hohe Fluoreszenzquantenausbeute und ist relativ unempfindlich gegenüber Polarität und pH-Schwankungen von Lösungsmitteln. Im Gegensatz zu den hochwasserlöslichen Fluorophoren Alexa Fluor™ 488 und Fluorescein (FITC) haben BODIPY™ Farbstoffe einzigartige hydrophobe Eigenschaften, die sich ideal zum Färben von Lipiden, Membranen und anderen lipophilen Verbindungen eignen. Der BODIPY™ TMR-X Farbstoff hat im erregten Zustand eine relativ lange Lebensdauer (normalerweise 5 Nanosekunden oder länger), was für polarisationsbasierte Fluoreszenzassays und einen großen Zweiphotonenquerschnitt für die Multiphotonenerregung nützlich ist. Zusätzlich zu reaktiven Farbstoffformulierungen bieten wir den Farbstoff BODIPY™ TMR-X an, der mit einer Vielzahl von Antikörpern, Peptiden, Proteinen, Markierungssubstanzen und Amplifikationssubstraten konjugiert ist, und für die Zellmarkierung und den Nachweis optimiert ist.

Der NHS-Ester (oder Succinimidylester) von BODIPY™ TMR-X ist das beliebteste Hilfsmittel für die Konjugierung des Farbstoffs mit einem Protein oder Antikörper. NHS-Ester können zur Markierung der primären Amine (R-NH₂) von Proteinen, aminmodifizierten Oligonukleotiden und weiteren aminhaltigen Molekülen verwendet werden. Die daraus resultierenden BODIPY™ TMR-X-Konjugate weisen helle Fluoreszenz, schmale Emissionsbandbreiten und eine relativ lange Lebensdauer des erregten Zustands auf, was für Fluoreszenzpolarisierungsassays und Zweiphotonenerregungsmikroskopie (TPE) nützlich sein kann.

Dieser reaktive Farbstoff enthält einen 7 Atome langen Aminohexanoyl-Spacer („X“) zwischen dem Fluorophor und der NHS-Estergruppe. Dieser Spacer hilft, den Fluorophor von seinem Anhaftungspunkt zu trennen und so die Interaktion des Fluorophors mit dem Biomolekül, an das er konjugiert ist, zu reduzieren.

Ausführliche Informationen zu diesem BODIPY™ TMR-X NHS-Ester:

Fluorophormarkierung: BODIPY™ TMR-X Farbstoff
Reaktive Gruppe: NHS-Ester (Succinimidylester)
Reaktivität: Primäre Amine auf Proteinen und Liganden, aminmodifizierte Oligonukleotide
Anregungs-/Emissionsmaxima (Ex/Em) des Konjugats: 544/570 nm
Extinktionskoeffizient: 60.000 cm-1M-1
Molekulargewicht: 608,45

Typische Konjugationsreaktion
Aminreaktive Reagenzien können mit praktisch jedem Protein oder Peptid konjugiert werden (das mitgelieferte Protokoll ist für IgG-Antikörper optimiert). Die Reaktion ist auf beliebige Proteinmengen skalierbar, optimale Ergebnisse erzielen Sie jedoch bei einer Proteinkonzentration von mindestens 2 mg/ml. Wir empfehlen Versuche mit drei verschiedenen Markierungsgraden unter Verwendung von drei unterschiedlichen molaren Verhältnissen von reaktivem Reagenz zu Protein.

Der BODIPY™ NHS-Ester ist in der Regel in hochwertigem wasserfreiem Dimethylformamid (DMF) oder Dimethylsulfoxid (DMSO) aufgelöst. Die Reaktion erfolgt in 0,1–0,2 M Natriumbikarbonat-Puffer, pH-Wert 8,3, bei Raumtemperatur 1 Stunde lang. Da der pKa-Wert des Amino-Terminus niedriger ist als der der epsilon-Aminogruppe des Lysin, erreichen Sie möglicherweise eine stärker selektive Markierung des Amino-Terminus mit einem Puffer, der näher am neutralen pH-Wert liegt.

Konjugataufreinigung
Markierte Antikörper werden in der Regel von freiem BODIPY™ Farbstoff durch Einsatz einer Gel-Filtrationssäule wie Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 oder ähnlichem getrennt. Wählen Sie bei sehr großen bzw. kleinen Proteinen ein Gelfiltrationsmedium mit geeigneter molekularer Ausschlussgrenze (MWCO), oder entscheiden Sie sich für eine Reinigung per Dialyse. Wir bieten verschiedene Aufreinigungskits, die für unterschiedliche Mengen von Antikörperkonjugat optimiert sind:
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 0,5 – 1 mg (A33086)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 20 – 50 µg (A33087)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 50 – 100 µg (A33088)

Weitere Informationen zur Protein- und Antikörpermarkierung
Wir bieten eine breite Auswahl an Molecular Probes™ Antikörper- und Proteinmarkierungskits, passend zu Ihrem Ausgangsmaterial und Ihrer Experimentanordnung. Weitere Optionen finden Sie unter Antikörper-Markierungskits, oder nutzen Sie unser Auswahlwerkzeug für die Markierungschemie. Weitere Informationen zu unseren Markierungskits finden Sie unter Protein- und Nukleinsäuremarkierungskits—Kapitel 1.2 im Molecular Probes™ Handbuch.

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