Ceruloplasmin Colorimetric Activity Kit

Das Kit zum Nachweisen der Ceruloplasmin-Aktivität, das nur für Forschungszwecke verwendet wird, ist ein kolorimetrischer Aktivitätsassay, der für die Quantifizierung und den Nachweis der Ceruloplasmin-Aktivität in Serum- und Urinproben entwickelt wurde.

Dieses vollständige, gebrauchsfertige Kit enthält durchsichtige 96-Well-Mikrotiterplatte(n), Ceruloplasmin-Standard (200 Einheiten/ml), Ceruloplasmin-Substrat und andere Komponenten für die Durchführung des Assays. Für die Verwendung dieses Kits ist ein 96-Well-Mikrotiterplatten-Lesegerät erforderlich, das die optische Dichte bei 560 nm ablesen kann.

Leistungsmerkmale
• Assay-Typ: kolorimetrisches Aktivitätskit
• Probentypen: Serum- und Urinproben
• Empfindlichkeit: 3,26 mU/ml
• Standardkurvenbereich: 31,2 mU/ml –1.000 mU/ml
• Reaktivität: artunabhängig

Hintergrund
Ceruloplasmin (Cp) ist ein Multicopper-Oxidase-Enzym, das in einigen Stoffwechselprozessen von Wirbeltieren an der sicheren Handhabung von Sauerstoff beteiligt ist. 1948 entdeckt, wurde ein blaues Protein aus der a2-Globulin-Fraktion des menschlichen Serums, das die Oxidase-Aktivität besitzt, von Holmberg und Laurell zu aromatischen Diaminen und Katechol aufgereinigt. Es wurde als Ceruloplasmin bezeichnet, was wörtlich „eine blaue Substanz aus Plasma“ bedeutet. Während der Evolution wurden spezielle Kupferstellen rekrutiert, um eine Reaktivität des Elektronentransfers über weite Bereiche sowie Sauerstoffbindung und -aktivierung in Proteinen zu ermöglichen, die für die Sauerstoffreaktivität in verschiedenen Organismen bestimmt sind.

Ceruloplasmin gehört zur Familie der Multikopper-Oxidasen, die zu den wenigen Enzymen gehören, die molekularen Sauerstoff binden können, um dessen vollständige Reduktion auf Wasser durchzuführen. Ceruloplasmin enthält 95 % des Kupfers im Serum. Das im Serum gefundene CP wird in der Leber exprimiert, aber auch im Gehirn, in der Lunge, in der Milz und in den Hoden. Dieser Assay wurde für Serum- und Urinproben validiert. Ceruloplasmine sind uralte Enzyme, die sich ähnlich wie das kolorimetrische Substrat verhalten sollen. Dieser Assay soll die Cp-Aktivität aus einer Vielzahl von Quellen messen.

Assay-Prinzip
Das Ceruloplasmin-Aktivitätskit wurde entwickelt, um Ceruloplasmin-Aktivität in gelösten Serum- ud Urinproben quantitativ zu messen. Ein humaner Ceruloplasmin-Standard wird zur Erstellung einer Standardkurve für den Assay bereitgestellt, und alle Proben sollten von der Standardkurve abgelesen werden. Die Proben werden im mitgelieferten Assaypuffer verdünnt und in die Wells einer halbflächenfreien Platte gegeben. Das rekonstituierte Ceruloplasmin-Substrat wird hinzugefügt und die Platte 60 Minuten lang bei 30 °C inkubiert. Das Ceruloplasmin in den Standards und Proben reagiert mit dem Substrat, um ein farbiges Produkt zu erzeugen. Die optische Dichte wird bei 560 nm abgelesen. Eine Erhöhung des Ceruloplasmin-Gehalts in den Proben führt zu einer Erhöhung des fuchsienfarbigen (rosa-violetten) Produkts.

Ceruloplasmin-Einheitendefinition
Die Ceruloplasmin-Aktivität basiert auf der veröffentlichten Bestimmung durch G. Curzon und L. Vallet, Biochem. J., 1960, 74:279-287. Aufgrund unserer optimierten Reagenzien und Inkubationszeiten ist die optische Dichte, die durch 1 U/ml Ceruloplasmin erzeugt wird, deutlich höher als 0,1 OD.

Weiterführende Links
Weitere Informationen zu ELISA-Kits
Weitere Informationen zu anderen Immunassays