Glutathione Reductase Fluorescent Activity Kit

Das Kit zum Nachweisen der Glutathion-Reduktase-Aktivität, das nur für Forschungszwecke verwendet wird, ist ein Fluoreszenzaktivitäts-Assay, der für die Quantifizierung und den Nachweis der Glutathion-Reduktase-Aktivität in Serum, Plasma, RBCs und Zelllysaten entwickelt wurde.

Dieses vollständige, gebrauchsfertige Kit enthält schwarze 96-Well-Mikrotiterplatte(n), Glutathion-Reduktase-Standard (200 mU/ml), Glutathion-Reduktase-Substrat und andere Komponenten zur Durchführung des Assays. Für die Verwendung dieses Kits ist ein 96-Well Fluoreszenz-Mikrotiterplatten-Lesegerät erforderlich, das Fluoreszenzemissionen bei 510 nm mit Anregung bei 390 nm ablesen kann.

Leistungsmerkmale
• Assay-Typ: Fluoreszenz-Aktivitätskit
• Probentypen: Serum, Plasma, RBCs und Zelllysate
• Empfindlichkeit: 0,009 mU/ml
• Standardkurvenbereich: 0,15 mU/ml – 5 mU/ml
• Reaktivität: Mensch

Hintergrund
Glutathion-Reduktase (GR) im menschlichen Hintergrund spielt eine indirekte, aber wesentliche Rolle bei der Verhinderung von oxidativen Schäden innerhalb der Zelle, indem sie dazu beiträgt, angemessene Konzentrationen von intrazellulärem Glutathion (GSH) aufrechtzuerhalten. GSH ist in Verbindung mit dem Enzym Glutathion-Peroxidase (GP) das aktive Reduktionsmittel, das für die Minimierung der schädlichen Wasserstoffperoxid-Zellkonzentrationen verantwortlich ist. Die Regeneration von GSH wird durch GR katalysiert. GR ist ein allgegenwärtiges dimerisches Flavoprotein mit 100 bis 120 kDa, das die Reduktion von oxidiertem Glutathion (GSSG) zu reduziertem Glutathion katalysiert, wobei Beta-Nicotinamidadenindinucleotidphosphat (NADPH) als Wasserstoffspender verwendet wird.

Moleküle wie NADPH wirken in einer Vielzahl enzymatischer Prozesse als Hydridspender. Es wird aufgrund seiner Rolle in der Re-Reduktion von GSSG zu GSH vermutet, dass NADPH auch als indirekt operierendes Antioxidans fungiert, wobei die anti-oxidative Energie von Glutathion aufrechterhalten wird. Dieser Assay wurde für Humanserum, EDTA- und Heparin-Plasma und isolierte Erythrozyten validiert. Die meisten Zelllysate sollten ebenfalls kompatibel sein. Die GR-Aktivität variiert je nach Gewebe und Spezies, jedoch kann dieses Kit die GR-Aktivität aus anderen als menschlichen Quellen messen.

Assay-Prinzip
Das Glutathion-Reduktase-Activity-Kit wurde entwickelt, um Glutathion-Reduktase (GR)-Aktivität in einer Vielzahl von Proben quantitativ zu messen. Zur Erzeugung einer Standardkurve für den Assay wird ein GR-Standard bereitgestellt und alle Proben sollten von der Standardkurve abgelesen werden. Das Kit verwendet ein firmeneigenes nicht fluoreszierendes Nachweisreagenz, das kovalent an die freie Thiolgruppe auf GSH bindet, die bei der Reduktion von oxidiertem Glutathion (GSSG) erzeugt wird, um ein stark fluoreszierendes Produkt zu erhalten. Nach dem Mischen der Probe oder des Standards mit Nachweisreagenz und der Inkubation bei Raumtemperatur wird das Fluoreszenzprodukt bei 510 nm in einem Fluoreszenzplattenlesegerät mit Anregung bei 390 nm gelesen

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