Thermo Scientific™ T4 Polynukleotidkinase (T4 PNK) katalysiert den Transfer des gamma-Phosphats von ATP auf die 5'-OH-Gruppe von einzel- und doppelsträngiger DNA und RNA, Oligonukleotiden oder Nukleosid-3'-Monophosphaten (Vorwärtsreaktion). Die Reaktion ist reversibel. In Anwesenheit von ADP zeigt T4 Polynucleotide Kinase 5'-Phosphatase-Aktivität und katalysiert den Austausch von Phosphatgruppen zwischen 5'-P-oligo-Polynukleotiden und ATP (Austauschreaktion). Das Enzym ist auch eine 3'-Phosphatase.

Highlights
• aktiv in Thermo Scientific Restriktionsenzymen, RT- und T4 DNA-Ligase-Puffern

Anwendungen
• Markierung der 5‘-Enden von Nukleinsäuren zur Verwendung als:
    – Sonden für die Hybridisierung
    – Sonden für die Transkriptkartierung
    – Marker für die Gelelektrophorese
    – Primer für die DNA-Sequenzierung
    – Primer für PCR
• 5'-Phosphorylierung von Oligonukleotiden, PCR-Produkten, anderer DNA oder RNA vor der Ligation
• Phosphorylierung von PCR-Primern
• Nachweis von DNA-Modifikation durch den [³²P]-Postlabelling-Assay
• Entfernung von 3'-Phosphatgruppen

Hinweise
• Die 5'-Enden von Nukleinsäuren können entweder durch die Vorwärts- oder die Austauschreaktion markiert werden.
• Polyethylenglykol (PEG) und Spermidin verbessern die Geschwindigkeit und Effizienz der Phosphorylierungsreaktion. PEG wird in der Austauschreaktionsmischung verwendet.
• Da T4 Polynucleotide Kinase durch Ammoniumionen gehemmt wird, sollten Sie Natriumacetat für die Fällung der DNA vor der Phosphorylierung verwenden.