Thermo Scientific DNase I, RNase-frei ist eine Endonuklease, die einzel- und doppelsträngige DNA spaltet. Hydrolysiert Phosphodiesterbindungen und produziert Mono- und Oligodeoxyribonukleotide mit 5'-Phosphat- und 3'-OH-Gruppen.

Die Enzymaktivität ist strikt von Ca2+ abhängig und wird durch Mg2+- oder Mn2+-Ionen aktiviert.

Bei Vorhandensein von Mg2+ spaltet DNase I jeden Strang der dsDNA unabhängig und in statistisch willkürlicher Weise. Bei Vorhandensein von Mn2+ spaltet das Enzym beide DNA-Stränge an ungefähr derselben Stelle und produziert DNA-Fragmente mit stumpfen Enden oder mit überhängenden Enden von nur einem oder zwei Nukleotiden.

Highlights

• rekombinantes Enzym
• von nicht-tierischem Wirt mit einem niedrigeren Gehalt an intrinsischen RNasen gereinigt

Anwendungen

• Vorbereitung DNA-freier RNA
• Entfernung von Template-DNA nach In-vitro-Transkription
• Vorbereitung DNA-freier RNA vor der RT-PCR und RT-qPCR
• DNA-Markierung durch Nick-Translation in Verbindung mit DNA-Polymerase I
• Untersuchungen von DNA-Protein-Interaktionen durch DNase I, RNase-freies Footprinting
• Erzeugung einer Bibliothek von zufällig überlappenden DNA-Inserts. Verwendung eines Reaktionspuffers, der Mn2+ enthält

Hinweis

DNase I ist empfindlich gegenüber physischer Denaturierung. Durch Invertieren des Röhrchens vorsichtig mischen. Nicht vortexen.