Phusion™ Hot Start II DNA-Polymerase- und dNTP-Mix (je 10 mM)
Phusion™ Hot Start II DNA-Polymerase- und dNTP-Mix (je 10 mM)
Thermo Scientific™

Phusion™ Hot Start II DNA-Polymerase- und dNTP-Mix (je 10 mM)

Dieses Paket enthält Phusion Hot-Start II High-Fidelity DNA-Polymerase (4 x 500 E) und einen dNTP-Mix hoher Qualität (je 10 mM,Weitere Informationen
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KatalognummerMenge
F549N2000 reactions
Katalognummer F549N
Preis (EUR)
2.675,00
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2000 reactions
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Dieses Paket enthält Phusion Hot-Start II High-Fidelity DNA-Polymerase (4 x 500 E) und einen dNTP-Mix hoher Qualität (je 10 mM, 2 x 1 ml).

Phusion Hot-Start II High-Fidelity DNA-Polymerase
Thermo Scientific Phusion High-Fidelity DNA-Polymerasen setzen einen hohen Standard für Hochleistungs-PCR. Mit einer 52 Mal niedrigeren Fehlerrate als Taq und einer 6 Mal niedrigeren Fehlerrate als Pfu ist Phusion High-Fidelity DNA-Polymerase eine ausgezeichnete Wahl für Klonierungen und andere Anwendungen, bei denen eine hohe Genauigkeit ausschlaggebend ist. Sie bieten eine zuverlässige Leistung mit kurzen Protokollzeiten, auch in Gegenwart von PCR-Inhibitoren, und erzeugen höhere Erträge mit geringeren Enzymmengen als andere DNA-Polymerasen.

• Hohe Genauigkeit (52X Taq)
• Keine unspezifische Amplifikation und Primer-Abbau während der Reaktionsaufstellung
• Schnelle PCR aufgrund kurzer Extensionszeiten (15 bis 30 s/kb)
• Erhöhte Produktausbeute mit minimalen Enzymmengen

Bei Verwendung von Phusion Hot-Start II High-Fidelity DNA-Polymerase, Die Amplifikation erfolgt ohne die Produktion unspezifischer Produkte aufgrund der Kombination von Phusion DNA-Polymerase und einem reversibel gebundenen, spezifischen Affibody-Ligand, der die DNA-Polymeraseaktivität bei Raumtemperatur hemmt. Der Affibody-Ligand hemmt auch die 3´→5´-Exonuklease-Aktivität der Polymerase und verhindert so den Abbau von Primern und der Template-DNA beim Ansetzen der Reaktion. Bei Temperaturen, die Polymerase-Aktivität fördern, wird der Ligand freigesetzt, was zur vollständigen Aktivierung der Polymerase führt. Phusion Hot-Start II High-Fidelity DNA-Polymerase wird bei hohen Temperaturen sofort reaktiviert, sodass kein separater Aktivierungsschritt in PCR-Protokollen erforderlich ist.

Verwendung der Phusion DNA-Polymerasen
Die Annealing-Regeln für Phusion DNA-Polymerasen unterscheiden sich von vielen gängigen DNA-Polymerasen (wie Taq DNA-Polymerasen). Optimale Ergebnisse erzielen Sie mit unserem Tm-Rechner unter www.thermofisher.com/tmcalculator.

Erfahren Sie mehr über alle Phusion DNA-Polymerasen ›

dNTP-Mix
Thermo Scientific dNTP-Mix enthält vorgemischte wässrige Lösungen von dATP, dCTP, dGTP und dTTP, jeweils mit einer Endkonzentration von 10 mM. Die Nukleotide haben eine Reinheit von mehr als 99 % und sind frei von Nuklease-Aktivitäten sowie menschlicher DNA und E. coli-DNA. Die Mischungen bieten die Möglichkeit, die Anzahl der Pipettierschritte und das Risiko von Fehlern beim Reaktionsaufbau zu reduzieren.

• Mehr als 99 % Reinheit durch HPLC
• Frei von humaner und E. coli-DNA
• Stabile DNA nach mehreren Gefriertauzyklen
• Bis zu 95 % der dNTPs verbleiben nach 7 Wochen bei Raumtemperatur in Triphosphatform
•Bis zu 90 % der dNTPs verbleiben nach 30 PCR-Zyklen in Triphosphatform (1 Minute bei 94 °C; 3 Minuten bei 72 °C)

Für alle molekularbiologischen Anwendungen, einschließlich PCR, Echtzeit-PCR, High Fidelity und Long PCR, LAMP-PCR, cDNA-Synthese, RT-PCR, RDA, MDA, DNA-Markierung und DNA-Sequenzierung.

Erfahren Sie mehr über alle dNTPs-Formate ›
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Specifications
Wiedergabetreue (vs. Taq)52 X
Hot-StartIntegrierter Heißstart
Anzahl Reaktionen2000 Reaktionen
ÜberhangStumpf
PolymerasePhusion Hot-Start II DNA-Polymerase
ProdukttypHeißstart-DNA-Polymerase und dNTP-Mix
Menge2000 reactions
ReaktionsformatSeparate Komponenten
VersandbedingungTrockeneis
Größe (Endprodukt)20 kb oder weniger
Konzentration2 U/μl
NachweisverfahrenPrimer-Sonde
Zur Verwendung mit (Anwendung)Heißstart-PCR, PCR mit hoher Wiedergabetreue
GC-Rich PCR PerformanceHoch
ReaktionsgeschwindigkeitSchnell
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
• Phusion Hot-Start II High-Fidelity DNA-Polymerase (2 E/µl)
• 5X Phusion HF Buffer
• 5X Phusion GC-Puffer
• DMSO
• 50 mM MgCl2 Lösung
• 10 mM dNTP-Mix

Bei -5 bis -30 °C lagern.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

What is enzyme concentration in Phusion Hot Start II High-Fidelity PCR Master Mix?

Phusion Hot Start II DNA polymerase concentration is optimized to give good results in most reactions. When the PCR reaction is set up according to the instructions, the final concentration of Phusion enzyme is 1 U in 50 µL reaction (0.4 U in 20 µL reaction).

Do Phusion DNA Polymerases add the non-template dependent 3'-A overhang?

Phusion DNA Polymerases generate blunt end products; therefore, blunt end cloning is recommended. If TA cloning is required, it can be performed by adding A overhangs to the blunt PCR product with e.g. Taq DNA Polymerase (Cat. No. EP0401). However, before adding the overhangs it is very important to remove all the Phusion DNA Polymerase by purifying the PCR product carefully, as the proofreading activity in Phusion DNA Polymerase is very strong. Any remaining Phusion DNA Polymerase will degrade the A overhangs, thus creating blunt ends again.

Can Phusion DNA Polymerases extend at 1 second/kb?

Yes it is possible, especially when amplifying smaller amplicons. Processivity of Phusion DNA Polymerases is 10 times that of Pfu. We recommend extension times of 15 s/kb for Phusion Flash PCR Master Mix. 15 s/kb is a conservative value that we can promise to work with almost any amplicon. In many cases, significantly shorter extension times (0-5 s/kb) can be used without compromising the yield. What separates Phusion Flash DNA Polymerase from other fast polymerases is that all steps in the PCR protocol can be shortened, including annealing and denaturation. This results in extremely fast protocols as compared with any other polymerase.

Can protocols optimized for Phusion DNA Polymerase be directly applied to Phusion Hot Start II DNA Polymerase?

Yes, protocols optimized for Phusion DNA Polymerase can be applied to Phusion Hot Start II DNA Polymerase reactions.

Do Phire and Phusion Hot Start II DNA Polymerases need a separate activation step in the PCR protocol?

No separate activation step is required since Phire and Phusion Hot Start II DNA Polymerases are inactivated by a reversibly bound, specific Affibody ligand that dissociates during initial denaturation.