Silica Bead DNA Gel Extraction Kit

Das Thermo Scientific Fermentas Kieselgel-Bead DNA-Gel-Extraktionskit ist ein einfaches und effizientes System zur DNA-Extraktion aus Agarosegelen und Reaktionsmischungen. Das Kit nutzt das modifizierte Protokoll von Vogelstein und Gillespie mit Solubilisierung des Agarosegels und der selektiven Adsorption von Nukleinsäuren auf speziell präparierten Kieselgelpartikeln bei hoher Salzkonzentration. DNA-gebundene Kieselgelpartikel werden ausgewaschen, um Kontaminanten zu entfernen und die reine DNA wird mit TE-Puffer oder Wasser eludiert.

Diese Methode erfordert wenig Manipulationen und ist schneller und einfacher als andere Methoden der organischen Extraktion. Verglichen mit Gelextraktionskits auf Säulenbasis bietet dieses DNA-Gelextraktionskit Flexibilität für das Vergrößern oder Verkleinern von Reaktions- und Elutionsvolumen. Die aufgereinigte DNA eignet sich für alle gebräuchlichen molekularbiologischen Verfahren wie z. B. Restriktionsverdau, Klonierung und Sequenzierung

Vorteile

• Flexibel – Einfache Vergrößerung und Verkleinerung von Reaktions- und Elutionsvolumina
• Effizienz – Über 80 % DNA-Rückgewinnung
• Schnell – Aufreinigung dauert nur 15 bis 20 Minuten
• Effektiv – Geeignet für DNA-Fragmente mit einer Länge von nur 100 bp
• Sicher – Keine Phenolextraktion

Anwendungen

• Aufreinigung von DNA-Fragmenten aus Agarosegelen, die mit TAE- oder TBE-Puffer vorbereitet wurden
• Konzentration von DNA-Proben beim Entsalzen oder Pufferwechsel
• Entfernen von Enzymen nach PCR, Restriktionsverdau, Dephosphorylierung oder Markierungsreaktionen
• Entfernen von nicht inegrierten Nukleotiden, Primern und Primer-Dimeren
• Entfernen von Linkern nach der Ligation
• Entfernen von Restsalzen, Phenol, Chloroform oder Ethidiumbromid
• Aufreinigung von RNA-freier Plasmid-DNA

Enthält Kieselsäurepulversuspension Bindungspuffer Konzentrierten Waschpuffer TBE-Konversionspuffer Detailliertes ProtokollHinweis

Vorsicht walten lassen, um eine DNA-Schädigung durch UV-Licht bei der Verwendung des mit Gel aufgereinigten DNA-Fragments in nachgeschalteten Klonierungsreaktionen zu vermeiden. Bei der Exzision einer Gelscheibe stets eine Box mit langwelligem UV-Licht verwenden (360 nm). Wenn nur eine Box mit kurzwelligem UV-Licht (254 bis 312 nm) verfügbar ist, sollten Sie die UV-Exposition auf wenige Sekunden reduzieren oder das Gel auf einer Glas- oder Plastikplatte belassen. Ersatzweise können sichtbare Färbungen in Standardagarosegele integriert werden, um die Visualisierung der DNA-Banden in Umgebungslicht zu ermöglichen (2, 3).