Die LanthaScreen®IkB alpha GripTite® Zelllinie enthält ein Fusionsprotein, das aus der für GFP und IkB (GFP wird mit dem N-Terminus von IkB-alpha fusioniert) codierenden cDNA besteht, die unter der Kontrolle eines stabil in GripTite® Zellen transfizierten CMV-Promotors steht. GripTite® ist eine modifizierte HEK293-Zelllinie, also eine humane Nierenzelllinie, die eine induzierbare Aktivierung des NFkB-Signalwegs durch eine Reihe verschiedener Liganden wie TNF und IL-1 aufweist. Die Aktivierung des NFkB-Signalwegs beinhaltet die Aktivierung von IKK, was zur Phosphorylierung seines Zielproteins IkB-alpha führt. Diese LanthaScreen Zelllinie ermöglicht daher die Analyse der IKK-Aktivität mittels GFP-IkB-alpha-Phosphorylierung als Auslesung. Das GFP-IkB-alpha-Konstrukt wurde mittels Lipofectamine™ 2000 in GripTite® Zellen transfiziert und anschließend mit Blasticidin selektiert. Diese Zelllinie ist eine klonale Population, die mittels Durchflusszytometrie mithilfe der GFP-Fluoreszenz als Sortiermarker isoliert wurde. Diese Zelllinie wurde unter optimierten Bedingungen mit TNF als Ligand für die IKK-vermittelte Phosphorylierung oder Ubiquitinierung von GFP-IkB-alpha für EC50 und Z'-Faktor validiert. Darüber hinaus wurde dieser Assay unter variablen Testbedingungen wie Zellplattierungsdichte, Stimulationszeit, DMSO-Toleranz und Lyse-Äquilibrierzeit auf Assayleistung getestet. Weitere Informationen mit alternativen Stimuli sind ebenfalls verfügbar. Kunden aus dem akademischen und gemeinnützigen Bereich fragen bitte nach Sonderpreisen.