Das Champion™ pET Expressionssystem liefert die höchste Proteinproduktion in E. coli. Während der Expression kann Ihr gewünschtes Protein einen Anteil von mehr als 50 % des gesamten zellulären Proteins erreichen. Basierend auf T7-Expressionsvektoren, die ursprünglich von Studier und Kollegen (1-3) entwickelt wurden, wird eine starke Expression erreicht, da die T7-RNA-Polymerase prozessiver ist als die native E. coli-RNA-Polymerase und sie der Transkription Ihre Genen von Interesse gewidmet ist. Die Proteinproduktion wird im System durch den Expressionsstamm BL21 Star™ E. coli weiter verbessert, der die Stabilität von mRNA-Transkripten signifikant verbessert und die Proteinexpression auf das bis zu Zehnfache erhöht

Das vereinfachte und effiziente direktionale TOPO™ Klonen ermöglicht die schnelle Eingabe eines Champion™ pET-Expressionsvektors. Diese Kits verfügen über linearisierte mit Topoisomerase I aktivierte Champion™ pET-Expressionsvektoren für eine direktionale Klonierung innerhalb von fünf Minuten. Die Technologie der direktionalen TOPO™ Klonierung erleichtert die Genexpression aus folgenden Gründen:

• Ein Korrekturleseenzym wird für die PCR verwendet, was zu weniger Fehlern bei geklonten Genen führt
• Mehr als 90 % der Klone befinden sich in der richtigen Ausrichtung für die Genexpression, wodurch die Zeit für das Kolonie-Screening reduziert wird

Sieben Champion™ pET-direktionale TOPO™ Expressionsvektoren sind lieferbar (Abbildung 1 und Tabelle 1): Jeder Vektor trägt einen T7lac-Promotor für die High-Level-Expression. Es stehen flexible Optionen zur Vereinfachung der Proteindetektion, zur Spaltung von Aufreinigungsmarkern, zur Auswahl von Plasmid-Trägerklons und/oder zur Verbesserung der Proteinausbeute zur Verfügung.
Mit den Champion™ pETdirektionalen TOPO™ Vektoren können Sie höchste Proteinproduktionen erwarten. Abbildung 2 zeigt die Expression des lacZ-Gens in Champion™ pET-direktionalen TOPO™ Vektoren. Abbildung 3 zeigt eine effiziente Spaltung mittels TEV-Protease des N-terminalen Tags eines aus pET151/D-TOPO™ exprimierten β-Galactosidase-Fusionsproteins.