Das PureLink™ HiPure Plasmid FP (Filter und Präzipitator) Maxiprep Kit isoliert Plasmid-DNA, von Zellpellet bis ultrareine DNA, in weniger als einer Stunde. Mit den in diesem Kit enthaltenen HiPure Filtersäulen und HiPure Präzipitatoren können Sie Plasmid-DNA ohne die in herkömmlichen Isolationsprotokollen erforderliche Zentrifugation reinigen. Die Qualität der gereinigten Plasmid-DNA entspricht der von zwei Läufen durch Cäsiumchlorid-Gradienten – die derzeit strengste Methode für die DNA-Aufreinigung – und eignet sich daher für Transfektion und andere Anwendungen, die hochreine Plasmid-DNA benötigen. Das PureLink™ HiPure Plasmid FP Maxiprep Kit (Tabelle 1) bietet:
• Einfache Protokolle – Bakterienlysatklärung und Isopropanolfällung ohne Zentrifugation
• Schnelle Ergebnisse – von E. coli-Zellpellets zu hochreiner, transfektionsfähiger Plasmid-DNA in etwa 60 Minuten
• Hohe Ausbeute – bis zu 850 µg aus einem Plasmid mit vielen Kopien

Funktionsweise
Das PureLink™ HiPure Plasmid FP Maxiprep Kit verwendet eine alkalische Lysemethode, um bakterielle Lysate ohne Zentrifugation schnell und einfach zu erstellen (Abbildung 1). Die einzigartige HiPure Filtersäule enthält eine in die Anionenaustauschsäule integrierte Lysat-Filtrationspatrone für die Klärung von Lysat in einem Schritt und die Plasmid-DNA-Bindung. Verunreinigungen wie RNA, Proteine und andere Kontaminanten werden mit einem einzigen Waschgang entfernt, und ultrareine Plasmid-DNA wird mit einem hochsalzigen Puffer eluiert. Zur Fällung und Entsalzung der DNA wird Isopropanol zur eluierten DNA hinzugefügt und die Mischung wird dann mit einer großen Spritze auf den HiPure Präzipitator aufgetragen. Nach einem anschließenden Wasch- und Trocknungsschritt wird die Plasmid-DNA einfach mit TE-Puffer oder Wasser aus dem HiPure Präzipitator eluiert. Durch die Verwendung des Präzipitators macht Zentrifugation überflüssig, wodurch das Risiko des Verlusts des DNA-Pellets während der Entfernung des Überstands verringert und Zeit gespart wird. Die daraus resultierende DNA kann für die anspruchsvollsten Anwendungen genutzt werden. Das gesamte Protokoll – von E. coli-Zellpellets bis hin zu ultrareiner transfektionsfähiger Plasmid-DNA – kann in etwa einer Stunde abgeschlossen werden.

Höchste Ausbeute und gebrauchsfertige Konzentrationen
Der HiPure Präzipitator wurde optimiert, um niedrigere Elutionsvolumina (bis zu 500 µl) für die Produktion hochkonzentrierter DNA ohne deutliche Reduzierung der Ausbeute zu ermöglichen. Tatsächlich ist die Ausbeute bei höheren Konzentrationen konsistent höher als die der Kits anderer Hersteller(Abbildung 2). Ausbeute und Konzentration können an die Anforderungen Ihrer nachgelagerten Anwendung angepasst werden.