Das Zero Blunt™ TOPO™ PCR-Klonierungskit für die Sequenzierung bietet eine äußerst effiziente, 5-minütige, Klonierungsstrategie in einem Schritt für die direkte Einführung der Proofreading-Polymerase-amplifizierten PCR-Produkte mit stumpfen Enden in einen Plasmidvektor zur Sequenzierung. In jedem Kit wird der pCR™-4Blunt-TOPO™ Vektor (siehe Abbildung) mit speziell gestalteten Sequenzierungs-Primerstellen verwendet, die aus jeder Reaktion mehr Insertsequenz und weniger Vektorsequenz ergeben. Diese Kits enthalten alles Notwendige zur Klonierung und Selektion von rekombinanten Vektoren, die das PCR-Fragment Ihrer Wahl enthalten.

pCR™-4Blunt-TOPO™ Vektor: Optimiert zur Sequenzierung
Ein Großteil der multiplen Klonierungsstellen wurde vom pCR™-4Blunt-TOPO™-Vektor entfernt, um den Abstand zwischen Sequenzierprimer- und Insert-Stelle auf maximal 33 bp zu verkürzen. Dies bedeutet, dass Sequenzierreaktionen weniger Vektorsequenz und mehr Insertsequenz ergeben. Der pCR™4Blunt™ TOPO Vektor bietet Bindungsstellen für 4 Standard-Sequenzierungsprimer: M13 forward, M13 reverse, T7 und T3. Davon enthalten die Kits je einen Aliquot.

pCR™4Blunt TOPO™ Klon-Selektion und -Manipulation
Der pCR™4Blunt TOPO™ Vektor enthält Ampicillin- und Kanamycin-Resistenzmarker und eine LacZα-ccdB-Genfusion für eine Positivselektion. Die minimierte multiple Klonierungsstelle des Vektors umfasst abgrenzende EcoRI-Schnittstellen für eine vereinfachte Exzision klonierter PCR-Produkte und eine einzigartige Sse8387I-Stelle für Nested Deletions vor der Sequenzierung. T7- und T3-Promoter sind auch für die In-vitro-Transkription vorhanden.

Vereinfachte TOPO™ basierte Klonierung
Mit dem TOPO™ Verfahren sind für die Klonierung weder PCR-Primer mit bestimmten Sequenzen noch post-PCR-Verfahren, eine Vektor-Vorbereitung oder andere zeitintensive Schritte zur DNA-Manipulation erforderlich. Geben Sie Ihre PCR-Reaktion einfach dem mitgelieferten Vektor mit gebundener Topoisomerase hinzu, warten Sie 5 Minuten, und führen Sie die Transformation in kompetente E. coli-Zellen durch.

Effiziente Klonierung
Mit bis zu 95 % der Klone, die das gewünschte Insert tragen, können Sie das Screening der Klone reduzieren und somit Zeit und Geld sparen. Der in diesem Kit verwendete pCR™-4Blunt-TOPO™ Vektor enthält keine Überhänge für eine effiziente Ligation von PCR-Produkten, die durch thermostabile Proofreading-Polymerasen, PCR-Produkte mit stumpfem Ende generieren.

Der Standard für die Klonierung
Bei der Klonierung ist das TOPO™ Verfahren seit über zehn Jahren für Tausende von Wissenschaftlern ein verlässlicher Partner. Die schnelle, einfache und effiziente TOPO™ Klonierung kam bereits bei einer Vielzahl von Vektoren und in unterschiedlichsten Anwendungen zum Einsatz.

Zero Blunt™ TOPO™ PCR-Klonierungs-Kit für die Sequenzierung – Kit-Formate
Das Zero Blunt™ TOPO™ PCR-Klonierungs-Kit für die Sequenzierung ist mit einer Vielzahl kompetenter Zellen erhältlich, die verschiedene Vorteile entsprechend Ihren Anforderungen bieten:

• Allgemeine Klonierung: Top10-Zellen (Kat.-Nr. K2875-J10, K2875-20, K2875-40)
• Hocheffiziente Klonierung: TOP10 Electrocomp™ Zellen (Kat.-Nr. Nr. K2880-20, K2880-40)
• Klonierung allgemein, Resistenz gegen Bakteriophagen T1: DH5α-T1R (Kat.-Nr. K2895-20)
• Schnelles Wachstum: Mach1™-T1^R chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. K2835-20)

Verwandte Links

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